Биохимия (практическая проблема)

[Angry_Biotechnologist]

Доброго времени суток!

Значит делали мы калибровочные кривые для моносахаридов (смесь фруктозы и глюкозы 10мг%)

МЕТОД

для первой кривой было взято

моносахаридный розтвор      мкл буферного раствора     концентрация мкг/мл

         10мг% (мкл)

           0                                                1000                                       0

      100                                                  900                                       10

       200                                               800                                        20

       300                                               700                                         30

       400                                               600                                         40

       500                                               500                                        50

       750                                               250                                         75

       1000                                               0                                            100

 

для второй кривой нужно было сделать 10-кратное растворение, для этого мы взяли 1мл 10мкг% р-ра и смешали с 9мл буферного р-ра (гипотетически концентрация должна быть 10мкг/мл в чистом раствореном розтворе). Тоесть мы просто использовали этот раствор вместо 10мг%-го (пропорции смешиваний в мкл такие же).

В каждую пробирку добавлено смесь 2х реактивов самоджи ( в пропорции 4 к 1 приготовленые перед беспосредственым добавлением). Растворы к первой кривой поставлено на водяную баню (15 мин. в ~98°С). После, добавлено реактив нельсона (который растворяет полученый Сu₂O), добавлено воды 2мл, очень хорошо вымешано и было измерено в спектрофотометре при длине волны λ= 520 нм.

Абсолютно тоже самое было сделано для второго сета

 

 Первая кривая (с концентрациями сахаров 10 20 30 40 50 75 100 мкг/мл) вышла отлично (могу выслать график если надо). Потом надо было сделать тоже самое, только 10х растворение. Тоесть концентрации должны быть 1 2 3  4 5 7.5 и 10 мкг/мл. И вот с меньшей концентрацией проблемы: раствор не дал никаких цветов (как был желтый так и остался, только 10 мкг/мл проявил слегка зеленый цвет).

Воопрос: в чем может быть проблема?

С уважением

Изменено 17 Марта, 2018 в 23:48 пользователем Angry_Biotechnologist