высаживание соли из раствора на поверхность клеток бактерий

[hivigar]

Здравствуйте!

 

Прошу вашего совета - долго думал где спросить, и решил, что коллоидная химия это то, что надо. Мне нужно подготовить препарат бактерий для растровой электронной микроскопии. Поскольку напылять золото/платину сейчас возможности нет, а есть только углерод - то снимки получаются недостаточно контрастными. Моя идея состоит в том, чтобы каким-то образом высадить нерастворимую соль тяжелого металла на поверхности клеток, причем достаточно тонким слоем. Это создаст электронноплотный слой и после напыления углерода за счет эмиссии вторичных электронов поможет повысить качество РЭМ. Сложность еще и в том, что в наличии не слишком много реактивов - то есть основные соли и кислоты конечно есть, но особой "экзотики" практически нету, поскольку лаборатория микробиологическая.

 

Одна из идей, которые пришли мне в голову была такой: можно сильно насытить убитые клетки на подложке хлоридом аммония, чуть ли не в насыщенном растворе подержать, потом быстро смыть остатки раствора и высушить. Получим клетки с большой концентрацией хлорида внутри. Потом на высушенные клетки нанести раствор ацетата свинца - хлорид начнет диффундировать наружу и тут же выпадать в виде хлорида свинца, который малорастворим. Я правда опасаюсь, что даже при быстром смывании хлорид у меня убежит из клеток, или слой хлорида свинца получится неровный.

 

Если у кого-то есть идеи, как можно это сделать лучше, или любым другим способом решить проблему - буду очень благодарен.

[fozgen]

Одна из идей, которые пришли мне в голову была такой: можно сильно насытить убитые клетки на подложке хлоридом аммония, чуть ли не в насыщенном растворе подержать, потом быстро смыть остатки раствора и высушить. Получим клетки с большой концентрацией хлорида внутри. Потом на высушенные клетки нанести раствор ацетата свинца - хлорид начнет диффундировать наружу и тут же выпадать в виде хлорида свинца, который малорастворим.

 

А почему Вы считаете, что только хлорид-ионы будут диффундировать наружу, а не ионы свинца внутрь клетки, образуя там хлорид свинца?

Но основная проблема в том, что уже на стадии "насыщения клетки" хлоридом аммония клетки могут существенно деформироваться и пропадет смысл использования электронного микроскопа.

Лучше все таки найти возможность напылить золото.

[hivigar]

А почему Вы считаете, что только хлорид-ионы будут диффундировать наружу, а не ионы свинца внутрь клетки, образуя там хлорид свинца?

 

Потому что ионы свинца довольно-таки большие, и им будет сложнее проходить через клеточную стенку, чем хлоридам. Кроме того, если хлорид свинца образуется внутри, это не помешает, главное, чтобы он высадился и на поверхности тоже.

 

Насчет деформации клеток - они не так уж просто деформируются, на самом деле. Пептидогликановый слой КС не дает. К тому же, я их насыщаю хлоридом аммония путем проведения через р-ры возрастающей концентрации, так что резкого осмотического шока не получается.

 

Меня интересует в основном поведение хлорида свинца в спиртовом и водном растворе. Как он выпадет, насколько крупными кристаллами, или же даст мелкокристаллический слой - или вообще аморфный - для меня процессы кристаллизации в растворах темный лес, поэтому сюда и обратился. Кстати, эмпирическую проверку метода сделаю уже на следующей неделе - тогда будет яснее немножко. А пока теорию бы как-то подтянуть...

[hivigar]

Собственно, за это время я несколько изменил метод, потому что все-таки опасался вымывания хлорида из клеток. Сначала я проведением через возрастающей концентрации водные р-ры повышаю концентрацию хлорида в клетках. Затем я делаю серию растворов, в которых последовательно уменьшается кол-во частей раствора хлорида аммония и возрастает число частей этанола. Затем я высушиваю препарат и наношу смесь раствора ацетата свинца со спиртом (примерно 80% спирта). При этом выпадает хлорид. Дальше я смываю не закрепившийся хлорид 96% этанолом и довожу абсолютным.

[hivigar]

Результаты применения метода - изображения стали четче, на отдельных клетках стала различима клеточная стенка - создается эффект, как будто смотришь на ПЭМ - середина более темная, оболочка - светлая. Стали видны перегородки в делящихся клетках. Теперь буду отрабатывать концентрации солей.