NotChemist

Здравствуйте. Собираюсь проводить связывание лизина с альдегидными группами окисленного декстрана в присутствии NaCNBH3 в качестве восстановителя и запутался с условиями реакции, в частности с рН. Какой оптимум рН у этой реакции? В большинстве доступных мне источников, для восстановления оснований Шиффа NaCNBH3, рекомендуется рН в диапазоне 6-8, но у некоторых авторов допускается рН до 10 (например, 1 или 2), а в некоторых работах (например, 3) восстановление при рН 9 проходит интенсивнее, чем при рН 7. Что есть истина? Поделитесь опытом, пожалуйста. И еще, на сколько токсичен NaCNBH3, какие меры предосторожности при работе с ним? Спасибо.

Спасибо за ответ. В общем, да, но моя цель - модифицировать твердую фазу для проведения иммунно-ферментного анализа для более эффективной сорбции антител (или антигена). Поэтому модификация в агрессивных средах не подходит - необходимо сохранить форму и прозрачность изделия. С другой стороны, возможность окисления полистирола персульфатами в похожих условиях была показана в ряде работ (например http://goo.gl/6Bo4hJ и http://goo.gl/vIglUk). Т.е. я окисляю (гидроксилирую) полистирол персульфатом, цепляю за гидроксильные группы поверхности аминосилан, далее ангидрид за аминогруппы силана и, наконец, за не прореагировавший ангидрид цепляю антитело (антиген или все что угодно с NH2 группой). Вопрос в том, что если персульфат аммония аминирует поверхность то в описанной последовательности выпадает стадия с аминосиланом, что есть хорошо. Но возможно ли это в принципе?

Уважаемые химики, подскажите пожалуйста, возможно ли аминирование полистирола при его обработке персульфатом аммония? Условия обработки такие: в лунки полистирольного планшета для ИФА заливали 30% раствор персульфата аммония и нагревали при 800С в течение 6 часов. В результате происходило окисление полистирола и образование на его поверхности гидроксильных групп. Далее, на поверхности связывали аминопропилтриэтоксисилан. В результате получали лунки покрытые аминогруппами, которые в дальнейшем служили основой для связывания сополимера малеинового ангидрида (http://u.to/HLVdCg). Что бы оценить степень связывания сополимера малеинового ангидрида с поверхностью проводили гидролиз не прореагировавших с аминогруппой силана ангидридных групп 1М NaOH, а потом оценивали содержание карбоксильных групп по реакции с толуиденом синим. Однако я заметил, что малеиновый ангидрид активно связывается с поверхностью, обработанной персульфатом, но не обработанной аминосиланом. Причем в контрольных лунках, не обработанных персульфатом, связывания ангидрида не происходило. Вот здесь http://goo.gl/XSpzGf описан способ введения аминогрупп в полистирол через его свободно-радикальное окисление УФ в растворе NH4OH в присутствии озона. Окисление полистирола персульфатом аммония тоже идет по свободно-радикальному механизму и тоже в присутствии NH4. Можно ли предположить, что и данном случае возможно аминирование полистирола? Спасибо.

Добрый день. Вопрос такой: можно ли говорить о том, что с рецептором связывается только определенный процент молекул лиганда, например 90% от внесенного количества? И этот процент не зависит от концентрации лиганда при условии низкой концентрации лиганда, не кооперативном связывании в соотношении 1:1 и линейной зависимости [лиганд] vs регистрируемый сигнал. Этот эффект наблюдали при связывании белков в концентрации до 1 мкг/мл с полимерной поверхностью (Analytical Biochemistry 105, 375-382 (1980). The Adsorptive Characteristics of Proteins for Polystyrene and Their Significance in Solid-Phase lmmunoassays. L. A.CANTARERO, J. E. BUTLER, J.W. OSBORNE), но в данном случае связывание не специфическое. Будет ли этот эффект при специфическом связывании? Спасибо.

Уважаемые химики, помогите решить следующую проблему. Необходимо пришить к полистирольному планшету, покрытому аминосиланом (свободная аминогруппа), сополимер малеинового ангидрида (http://www.sigmaaldr...ng=en&region=BY). Как я понимаю ангидрид спонтанно реагирует с аминогруппой в безводной среде, при нормальных условиях. Реакция в водной среде тоже возможна, но с меньшим выходом из-за гидролиза ангидрида. В качестве растворителя для ангидрида я использую безводный ДМСО. При растворении ангидрида ДМСО становиться розовым (это нормально?). Аминогруппы предварительно депротонирую 0,02 M Na2CO3 (рН 10,7). Отмываю водой. Вношу раствор ангидрида, инкубирую 14 часов при комнатной температуре. Отмываю водой. Получаю поверхность активированную малеиновым ангидридом (т.е. часть ангидрида полимера связалась с поверхностью, часть свободна). Далее, на активированную поверхность пытаюсь посадить белок со свободной аминогруппой лизина. Реакцию провожу в растворе борной кислоты рН 9.0. Результаты оцениваю в ИФА. Проблема в следующем - судя по ИФА нужного белка на подложке нет. Что я делаю не так? Спасибо.

Понял, спасибо. Тогда любой способ увеличения полярности даст подобный результат (см. например https://mega.co.nz/#!ZsdhAAAA!c4RGNwjuhyEqtjWn3bkWqumBmZpU00Z-jnuuLeL6VNg)

Большое спасибо! Я так понял, что нитрование бесполезный этап.

J. Kaur, K.V. Singh, M. Raje, G.C. Varshney, C.R. Suri, Anal. Chim. Acta 506 (2004) 133 можно взять вот здесь: https://mega.co.nz/#!RosUjToR!PNaJNldTSEe7bjZ6Pv4MhgtBCcU5jcRzno0KBD8nX4E

Выкладываю, но боюсь, что ясность эта публикация не внесет. Также есть публикация авторов методики в Nature protocols - http://www.nature.co...styrene+surface

Здравствуйте. Помогите разобраться в в проблеме, сам я не химик и поэтому нуждаюсь в консультации экспертов. Мне необходимо ''зацепить'' -NH2 группу за поверхность полистирольного планшета. В статьях Analytica chimica acta Vol. 607, 2008, p. 92–99 и Analytica Chimica Acta Vol. 506, 2004, p. 133–135 описан следующий способ: в начале проводят нитрование полистирола HNO3 в H2SO4, далее обрабатывают планшет водным раствором аминопропилтриэтоксисилана (APTES) и получают -NH2 группу ковалентно связанную с бензольным кольцом стирола в мета-положении (см. прикрепленные файлы). Механизм внедрения -NO2 группы я более или менее понимаю, но как APTES ковалентно связывается с полистиролом? Я так понимаю, что -NO2 группа ориентирует 2-ой заместитель в мета-положении , но это же ориентант 2-го рода и снижает активность бензольного кольца т.е. препятствует образованию связи. Возможно ли такое аминирование полистирола и если не трудно поясните механизм реакции. Спасибо. Strategies for direct attachment to PS_2.pdf