Angry_Biotechnologist

Неправильно Сумарно вулканы и вулканические озера дают около 400млн тон углекислого газа в год, человеческая активность дает около 35 МЛРД тон в год. В основном вкладываются морской транспорт и ТЕС. Машины на двигателях дают меньше 1% СО2

мг экв ГА/мг с.м - используют для фенолов разных. Это буквально мг эквивалента галловой кислоты на мг сухой масы. Математика следущая: С(общ. фенолов мг)= мг галловой кислоты (с на грам сухой масы) с калиб кривой * ((объем екстракта в мл)/(масу екстаркта в г)) у все по разному потому-что у всех свои яблоки. Видимо в штатах это контролируется, поэтому уровень низкий.

допустим Na3[Fe(SCN)6] разложится на состовляющие йоны 3Na+ + Fe3+ + 6SCN- делаем ICE табличку Na3[Fe(SCN)6] --- 3Na+ + Fe3+ + 6SCN- I 1М 0 0 0 C -х +х +х +х E 1-х х х х Kнест = 1-x/x3 Кнест где-то должен быть дан. И надо смотреть сколько их там (может быть несколько - на разные стадии дисоциации)

странный препод. ЭДТА (в форме дво-натриевой соли) слегка гигроскопическое, но что-бы прям нельзя было нормально его отвесить... фигню какую-то вам сказали ИМХО. С ЭДТА делают р-ры 0.02М где надо 0.7 с хвостиком грамов на 100мл и все нормально.

имидазольный буфер 25мл 0.2М имидазола + 12.15мл 0.2HCl и до 100мл водой. pH должно быть 7

Я летом тоже чучуть хапнул NO, кашлял сильно целый день, но ничего, потом отпустило. Хотя правда потом пару месяцев были приступы кашля внезапные. Сейчас вроде норм. Но с такими вещами смотреть надо, абы чего не случилось. Если через час действительно все будет ок - тогда возможно и пронесло.

Еее дядь. Бегом в больничку. Кровью кашляет и на форумах пишет. Если с больнички выпишут - значит жить будеш.

ацетатный буфер например

В чистой воде не получится - продукты метаболизма бактерий будут. Плюс абсолютно все съесть они тоже не смогут, они перейдут в фазу плато раньше.

Тут один был что "партизанскую пушку" делал, вам бы с ним колаб сделать с такими проповедями

Если были заморожены в -70 меньше то можно и скорее всего будет все ок. Но если не получится то причина будет ясна.

сахарозу наверное, to play safe как говорится. Но тоже смотрите по ситуации, может не подойти - тогда глицерин. Если и глицерин не пойдет то можно что-то специфическое посмотреть. С гуанидином внимание - сильный хаотроп

Если есть секвенция то сделайте 3д моделинг, можна будет глянуть на структуру и потенциально выяснить где что ламается https://www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/howto/view-3d-struct-prot/ или https://swissmodel.expasy.org/interactive (рекомедую). Добавте еще параметры в которых у вас проходит експресия (кислотность, температура и растворитель), возможно проблема с ними. Вообще опишите что вы делали с ензимом, с чего изолировали как ставили в библиотеку/клонировали и т.п. Сложный воопрос - мало информации

тогда мягкий детергент с стабилизатором Напишите потом как прошло - успешно или нет

Можно больше информации? Какой белок, из каких бактерий, какие субединицы? Пока что выглядит так что у вас завелась некая структурная мутация (если нативный белок держался вместе, а теперь вдруг перестал) или же плохой выбор буфра

Это мембранный белок как я понимаю? Для них можна использовать ещё такой тег https://cube-biotech.com/what-is-rho1d4-an-affinity-tag-specialized-for-membrane-proteins Надо дать какие-то нейонные детергенты (типа tween или октил глюкозид, можно даже мягче DM, DDM, L-MNG, GDN - что-бы выхлоп функционального белка был выше) + стабилизирующий агент (сахароза или глицерин). Вот интересная публикация на тему: https://www.researchgate.net/publication/264049754_Expression_solubilisation_and_purification_of_a_functional_CMP-sialic_acid_transporter_in_Pichia_pastoris Какой именно детергент - тут уже сами смотрите, так как каждый белок ведет себя чучуть по разному в разных детергентах.

Так у вас должен быть тег полигистидиновый - он цепляется за метал (в вашем случае - никель). Тут два видео - первое, работа в практике, второе - теория.

ну да, а что удивительного то? Ходил себе лев, умер. Потом пришел другой через 15к лет - тоже умер. И вот тебе два трупа в морозилке. Возьми проведи експеремент - кусок мяса положи в морозилку, заморозь на 1-2 года, потом положи еще один кусок и тоже его заморозь на пару месяцов - потом разморозь и посмотри если есть разница 😆

Добрый день, Вам нужен HIC https://www.bio-rad.com/en-cz/applications-technologies/introduction-hydrophobic-interaction-chromatography-hic?ID=MWHB53MNI

Приветствую! Если правильно понял воопрос: https://www.jstor.org/stable/2362985?seq=1#metadata_info_tab_contents https://www.researchgate.net/post/Can-anyone-help-me-with-problem-with-kinase-expression-in-BL21 https://www.google.com/search?q=protein+kinase+from+e+coli+bl21&rlz=1C1GCEU_csCZ970CZ970&oq=protein+kinase+from+e+coli+bl21&aqs=chrome..69i57.2058j0j7&sourceid=chrome&ie=UTF-8

Скорее всего нитраты попали в колодец после удобрения местных полей

Тема очень популярна по заграницах уже так с десяток лет минимум.

Тема не туда поставлена, но я попробую ответить А - реакция идет, значит реагент приготовлен нормально Б - Очень возможно что выбраный лиганд просто заблокировал активный центр из-за чего правильный белок был изолирован, но он неактивный. С - нет, мы же нашли фракцию белка Д - возможно... наверное? Аффинная хроматография должна вытягивать именно интересующюю фракцию, этот метод имеет высокую специфичность, он не должен давать осечек (разве что сама колона была неправильно приготовлена). Посему скорее всего нет Остается вариант Б - некий лиганд просто прицепился к активному центру и прeвратился в ингибитора (non competitive inhibitor)

К сожалению я не знаю, помочь тут не смогу. В идеале проконсультируйтесь с специалистом. Нормальный биотехнолог для вас может посчитать время фильтрации, проток, тип фильтров и т.п. Плюс этот человек должен знать местные точки збыта техники и её типы (как минимум в Европах это все изучают прям в универе). Потратите екстра денежку, но будет професионально сделаная система с высоким КПД.

еще вариант вспомнился - cross flow filtration