Выделение ДНК из томатов

[swarekwood]

Доброго времени суток, господа химики, биохимики и врачи (если здесь, конечно, такие сидят :P )

 

Суть такова: сегодня защищать работу по выделению ДНК из томатов. Сейчас до полуночи сидел читал БХ в плане освежить общую теорию про ДНК, секвенирование, амплифицирование, ПЦР и прочие вещи. Теперь, соб-сно, готовлю вопросы на защиту.

 

Листочек с практикумом прилагается.

 

Теперь прошу помочь касаемо вопросов:

 

1. Ответил так: Помидор, как плод высшего растения, состоит из большого количества клеток, которые расположены слоями. Если не провести предварительного перемалывания, то экстракция ДНК будет проводиться медленно и с очень малым выходом, т.к. клетки нижележащих слоёв не будут подвергнуты действию раствора.

 

Верен ли такой ответ?

 

2. Честно, туплю. ПАВ, обладая мембраннотоксинным действием, образует в цитомембране своеобразные каналы, которые соединяют клетку со внешней средой. А что дальше? Мне кажется, что соль проникает в клетку, за ней проникает вода по осмотическому закону и происходит лизис клетки путём её разрушения. НО почему тогда соль не выходит из этой самой клетки обратно во внеклеточную жидкость? Или эти каналы действуют только в направлении "В", а не "ИЗ"? Или самое предположение про соль не верно?

 

3. Думаю, сок апельсина добавляли из-за высокого содержания в нём лимонного сока, дабы изменить pH буфера. Вопрос: в какую сторону он меняется и что при этом происходит с ДНК?

 

4. Зачем в пробирку добавляли этанол? Понятно, что для выделения ДНК, но каким образом и через какие хим реакции?

 

Заранее спасибо за ответы. С уважением.

 

т.к. форум не хочет прикреплять изображение, заливаю на радик

 

[punica]

Ананасовый,а не апельсиновый сок!Ананасовый сок содержит бромелайн,который помогает разрушать белки.Подробнее http://luts.ucoz.ru/...ktov/38-1-0-644 (пункт про удаление белков).

Осаждение ДНК этанолом http://molbiol.edu.r...ocol/09_01.html (чуть иначе).

Про измельчение-все верно. http://www.nbuv.gov....62011-28-37.pdf

Ну вот,чтобы не искал:

"Если образцы пищевых продуктов не пере-ведены в порошкообразную или гранулирован-ную форму, то перед экстракцией ДНК прово-дим их предварительную пробоподготовку из-мельчением. Образцы в виде муки мелкого или грубого помола являются идеальными для экс-тракции ДНК, а образцы в более грубой форме для повышения эффективности экстракции ДНК необходимо сначала измельчить или растереть до образования относительно мелких частиц. После измельчения образца его взвешиваем и используем соответствующее количество в за-висимости от способа экстракции ДНК."

Про пав тоже вроде как правильно.

http://window.edu.ru...es/0401_010.pdf -начиная со страницы 13,там где про разрушение клетки детиргентами.

http://46.4.42.104/p...ja-i-zhizn.html (фотографии в низу могут пригодится).

http://900igr.net/ka...gentom-PAV.html

http://ru.wikipedia.org/wiki/Осмотическое_давление

Интернет,и никакой магии.)))А вообще,по умному,надо бы книг пару по биологии,биохимии,микробиологии,ботанике поднять.Там все это должно быть на пальцах расписано.

Изменено 2 Октября, 2012 в 20:47 пользователем punica