Пробоподготовка для ГХ

[lyksor25]

Доброго времени суток!

 

Уважаемые химики, прошу вашей помощи! У меня следующая проблема: необходимо определить жирнокислотный состав молока.

 

Для проведения данного анализа решил провести пробоподготовку по ГОСТ 51486 (пункт 6). Так как использовал обычное молоко (и сырое и пастеризованное - результат один), то взял 31 г. молока, чтобы обеспечить в пробе около 1 г чистого жира (М.Д.Ж. - 3,2%) Добавляю 15-20 мл раствора метилата натрия в метаноле и кипячу 10-15 минут, затем добавляю 1 молярный раствор серной кислоты до кислой реакции по лакмусу и снова кипячу 10-20 минут. Полученную смесь охлаждаю под струёй воды и добавляю 25 мл воды. полученную смесь пропускаю через фильтр "Синия лента" для удаления свернувшегося белка. Получаю жидкость по цвету как яблочный сок. После этого пытаюсь экстрагировать метиловые эфиры гексаном, для чего вливаю в смесь 10 мл гексана и интенсивно перемешиваю. И вот тут начинается не понятная ситуация - гексан отделяется от водной фазы (как и должно быть), но принимает вид мутной жидко-желеобразной фазы (напоминает пектиновый гель, при малых концентрациях пектина). Полученную фазу отделяю и пытаюсь отмывать водой - бесполезно, все остается изначально.

 

Указываю выше промежутки времени и объемов, т.к. проделал уже с 10 попыток, и пытался подобрать условия - не вышло.

 

Сделал предположение, что проблема в том, что использую не жир, а молоко. Путем центрифугирования (5000 об/мин - 30 мин.) отделил жирную фазу, заморозил и отделил от сыворотки. Попробовал с использование данного продукта. На стадии охлаждения, при внесении воды смесь приобретает белый, непрозрачный цвет. При добавлении гексана ситуация та же, только теперь крайне плохо видно разделение фракций.

 

Варианты с проблемами в реактивах проверил - полностью заменил все реагенты, трижды перемыл всю посуду, уже не знаю что делать!

Прошу вашей помощи!!!

За ранее благодарен за помощь!!!!!

[Capsid]

Путем центрифугирования (5000 об/мин - 30 мин.) отделил жирную фазу, заморозил и отделил от сыворотки. - вот тут уже половина работы проделана.

Получили масло? Расплавляете его, отфильтровываете пару раз через фильтровальную бумагу при температуре 50° и у вас будет практически чистый жир. Дальше идете с пункта 6.4. Хотя, как по мне, проще и быстрее метилирование при помощьи KOH в метаноле.Растворять в гексане или изо-октане.

Изменено 23 Сентября, 2014 в 12:54 пользователем Capsid

[ssch]

Метилирование при помощьи KOH в метаноле? Ничего не перепутали? Гидролиз будет.

[Capsid]

Метилирование при помощььи KOH в метаноле? Ничего не перепутали? Гидролиз будет.

будет переэтерификация (встряхивать 30с). После неё нейтрализуют гидросульфатом натрия, фильтруют и колят.

[ssch]

Переэтерификация в присутствии щелочи - очень сомнительно....

[chemister2010]

Тем не менее она так и делается.

[ssch]

Пробоподготовка - большая половина правильного анализа по ГОСТу или для упрощенного рутинного анализа. Это так и делается, спору нет.

Могу себе представить, что сначала под действием щелочи идет гидролиз жира, затем при подкислении получившиеся соли карбоновых кислот дают свободные кислоты, которые и этерифицируются метанолом, смесь сложных эфиров готова для анализа.

 

Не могу понять, что такое метилирование в присутствии щелочи в метаноле или переэтерификация в щелочной среде.

[chemister2010]

Я тоже не верил пока не посмотрел литературу. Щелочь используется как катализатор реакции переэтерификации в промышленности.

[NLVN]

Совершенно верно. Этот процесс используют для получения биодизеля - растительные жиры нагревают с метанолом в присутствии щелочи - идет переэтерификация или алкоголиз - как кому нравится. Гидролиза там нет - т.к. нет воды. Поэтому не сомневайтесь - получатся метиловые эфиры. А на счет мутности - это не м.б. вода? По моей практике небольшая примесь воды в орг растворителях - бензо, толуол, петролейка - дает нерасслаивающуюся муть, которая убирается только осушителем.