Обращённо-фазная ВЭЖХ

[Romanroman5999]

Здравствуйте всем! 

задача такова: Идентифицировать гамма-аминомасляную кислоту (ГАМК) в питательном бульоне, содержащем предшественник ГАМК глутаминовой кислоты, после культивирования условного штамма, способного её синтезировать. Для этого применяем метод обращённо-фазной ВЭЖХ. В данной методике описаны условия для проведения хроматографии.

Авторы данной методики предлагают для дериватизации ГАМК смешать 20 мкл OPA-MCE с 10 мкл пробы и 100 мкл боратного буфера и вколоть 20 мкл в колонку.

 

Кто-нибудь может объяснить зачем пробу, на стадии дериватизации смешивают с боратным буфером? Получается, что проба здорово разбавляется. 

 

 

HPLC Analysis of GABA.

GABA was derived by mixing

10 мкл of the amino acid solution with 20 мкл OPA-MCE and

100 мкл boric acid buffer. The mixture was reacted at room

temperature for 5 min. An S1121 Solvent Delivery System

(Syknm) with UV/VIS Detector 3200 was used for separation

and detection of amino acids. A Hypersil ODS colum (250

x 4.6 mm, 5 m) was used for separation of amino acids.

All samples and the mobile phase were filtered with 0.45

m syringe filter discs and degassed by sonication. Sample

aliquots of 20 мкл were injected into the analytical column and

the mobile phase flow-rate was fixed at 0.8 ml min-1 and at

the wavelength of 338 nm.