Опыт Моргана-Эльсона

[Sf1189]

Напишите пожалуйста методику и ход опыта для определения глюкозамина по методу Моргана -Эльсона, Пожалуйста, помогите.

[ZaecЪ]

http://www.bio-cat.ru/ebook.php?file=gerhardt2.djvu&page=53 пункт 17.2.6. "Определение гексозаминов в очищенных пептидогликанах" и пункт 17.2.7. "Гексозамины в сложных растворах"

 

сами книги на рутрекере

и ещё

                          Определение содержания гексозаминов          Для определения гексозаминов используют колориметрический метод   Элсона  и Моргана (Biochem. J., 27, 1824 (1933)). Метод основан  на   конденсации аминосахара с щелочным ацетилацетоном с образованием 2-   метил-3-ацетилпиррола  и  2-метилпиррола;  в  присутствии  реактива   Эрлиха    (4-диметиламинобензальдегида)   2-метилпиррол    является   основным  хромогеном.  Образование этих  хромогенов  сопровождается   появлением  красновато-розоватой  окраски.  В  реакции  этого  типа   глюкозамин  и  галактозамин дают одинаковую  окраску  с  одинаковой   величиной  молярной  экстинкции. Взаимодействие  между  сахарами  и   аминокислотами мешает определению, поэтому гексозамины отделяют  от   аминокислот на ионообменной колонке.       Если  гексозамины находятся в связанном виде,  то  их  отделяют   путем  гидролиза в 4Н соляной кислоте при 100 -С в течение 4  часов   в запаянных ампулах под азотом.                          Реактивы          Приготовление щелочного раствора ацетилацетона       2,4-пентандион  (ацетилацетон)  должен  быть  бесцветным.   Его   накануне   перегоняют  и  хранят  в  темной  посуде   при   4   -С.   Непосредственно перед использованием 2 мл ацетилацетона  растворяют   в 98 куб. см 1 М Na2CO3.       Реактив     Эрлиха    2,7%-ный    (вес/объем)    раствор     4-   диметиламинобензальдегида в смеси этанол  -  концентрированная  HCl   (1:1,   по   объему).  Этот  реактив  следует   готовить   в   день   определения.                             Проведение анализа          В  пробирках  со  стеклянными  пробками  смешивают  1  куб.  см   раствора  гексозамина (5 - 30 мкг) с 1 куб. см  раствора  щелочного   ацетилацетона.  Пробы нагревают в течение 45  мин.  при  100  -С  и   затем  охлаждают водопроводной водой. Добавляют 4 куб. см  95%-ного   этанола  и  тщательно  перемешивают, а затем добавляют  1  куб.  см   реактива  Эрлиха  и  опять  интенсивно перемешивают.  На  последнем   этапе  следует периодически выпускать образующийся СO2, приоткрывая   пробку несколько раз во время перемешивания. Пробирки оставляют  на   1  ч  при  комнатной  температуре  и  затем  определяют  оптическую   плотность  раствора  при  530  нм. Параллельно  проводят  обработку   стандартных и слепых проб.

Изменено 25 Февраля, 2015 в 21:01 пользователем ZaecЪ

[Sf1189]

http://www.bio-cat.ru/ebook.php?file=gerhardt2.djvu&page=53 пункт 17.2.6. "Определение гексозаминов в очищенных пептидогликанах" и пункт 17.2.7. "Гексозамины в сложных растворах"

 

сами книги на рутрекере

и ещё

СПАСИБОО!!!!! ОГРОМНОЕ!