астроциты

[фосолиф-кимих]

1) Нужна линия клеток астроцитов человека.

2) Нужно измерить способность ряда веществ IC₅₀ подавлять биосинтез ГАМК в астроцитах.

3) Нужно измерить цитотоксическую активность IC₅₀ этих же веществ по отношению к астроцитам.

4) Доказать, что подавление биосинтеза ГАМК осуществляется по механизму: ингибирование МАО-Б.

Желаемый результат: вещество подавляет биосинтез ГАМК в астроцитах в большей степени, чем селегилин и разагилин (селективные необратимые ингибиторы МАО-Б), но по тому же механизму (ингибирование МАО-Б) и не убивает астроциты. 

[ALLOE]

16.03.2023 в 13:18, фосолиф-кимих сказал:

ГАМК

Это гамма аминомасляная кислота?

[фосолиф-кимих]

16.03.2023 в 17:01, ALLOE сказал:

Это гамма аминомасляная кислота?

Да, ГАМК это гамма аминомасляная кислота. 

[Loiso Pondohva]

16.03.2023 в 11:18, фосолиф-кимих сказал:

1) Нужна линия клеток астроцитов человека.

2) Нужно измерить способность ряда веществ IC₅₀ подавлять биосинтез ГАМК в астроцитах.

3) Нужно измерить цитотоксическую активность IC₅₀ этих же веществ по отношению к астроцитам.

4) Доказать, что подавление биосинтеза ГАМК осуществляется по механизму: ингибирование МАО-Б.

Желаемый результат: вещество подавляет биосинтез ГАМК в астроцитах в большей степени, чем селегилин и разагилин (селективные необратимые ингибиторы МАО-Б), но по тому же механизму (ингибирование МАО-Б) и не убивает астроциты. 

Вы это как задачу на аутсорс запрашиваете?)
Или вам интересна методология? 
Опять же, цель просто получить не нейротоксичный необратимый МАО Б ингибитор с большей потентностью? 

[фосолиф-кимих]

07.05.2023 в 18:04, Loiso Pondohva сказал:

Вы это как задачу на аутсорс запрашиваете?)
Или вам интересна методология? 
Опять же, цель просто получить не нейротоксичный необратимый МАО Б ингибитор с большей потентностью? 

Возможны два варианта.

 

1. Мы посылаем вещества и платим за биологический и аналитический эксперимент.

2. Мы платим за клеточную линию и расходные материалы и сами осуществляем биологический эксперимент. Как МТТ тест сделать мы знаем, а вот с анализом на ГАМК проблемы. В культуральной среде наномолярные концентрации ГАМК, что за пределами чувствительности ЯМР и МС.

 

Просто получить потенциальное ЛС мало. Нужно ещё доказать. 

 

[Loiso Pondohva]

07.05.2023 в 17:23, фосолиф-кимих сказал:

Возможны два варианта.

 

1. Мы посылаем вещества и платим за биологический и аналитический эксперимент.

2. Мы платим за клеточную линию и расходные материалы и сами осуществляем биологический эксперимент. Как МТТ тест сделать мы знаем, а вот с анализом на ГАМК проблемы. В культуральной среде наномолярные концентрации ГАМК, что за пределами чувствительности ЯМР и МС.

 

Просто получить потенциальное ЛС мало. Нужно ещё доказать. 

 

Хм, ну тогда я наверное не ваш вариант прямо сейчас, но успехов с поисками! 

МТТ то делать любой дурак умеет, что правда то правда) 
Второкурсника вам в руки.

Астроциты (и глиомные и нормальные) конечно нежнее большинства других культур, но работать с ними можно...Там протоколы похожие. 

А вот ГАБА...Я сначала подумал можно модифицировать как-нибудь имуногистохимию, чтобы из качественного анализа получить количественный. 
Но мне тут напомнили что есть года 70го папир-протокол по измерению 10^-14 мольных концентраций в отдельных клетках. Может вам поможет. Альтернативно всякую High performance жидкостную хромотографию не рассматривали?  o-phthaldehyde (OPA)-derivation protocol как классика ещё. 

Journal of Neurochemistry - February 1971 - Otsuka - MEASUREMENT OF ‐AMINOBUTYRIC ACID IN ISOLATED NERVE CELLS OF CAT.pdf

[фосолиф-кимих]

07.05.2023 в 21:04, Loiso Pondohva сказал:

Хм, ну тогда я наверное не ваш вариант прямо сейчас, но успехов с поисками! 

МТТ то делать любой дурак умеет, что правда то правда) 
Второкурсника вам в руки.

Астроциты (и глиомные и нормальные) конечно нежнее большинства других культур, но работать с ними можно...Там протоколы похожие. 

А вот ГАБА...Я сначала подумал можно модифицировать как-нибудь имуногистохимию, чтобы из качественного анализа получить количественный. 
Но мне тут напомнили что есть года 70го папир-протокол по измерению 10^-14 мольных концентраций в отдельных клетках. Может вам поможет. Альтернативно всякую High performance жидкостную хромотографию не рассматривали?  o-phthaldehyde (OPA)-derivation protocol как классика ещё. 

Journal of Neurochemistry - February 1971 - Otsuka - MEASUREMENT OF ‐AMINOBUTYRIC ACID IN ISOLATED NERVE CELLS OF CAT.pdf 672.88 \u041a\u0431 · 0 скачиваний

МТТ сделать то можно, но нужны соответствующие клетки. 

Линия NHA от Lonza подошла бы, но есть проблемы с логистикой. 

Может знаете другую линию ГАМК производящую?

Анализ на ГАМК можно делать ВЭЖХ с УФ детектором, но нужно дериватизировать, чтобы увеличить молярную экстинкцию.

[Loiso Pondohva]

08.05.2023 в 14:43, фосолиф-кимих сказал:

Линия NHA от Lonza подошла бы, но есть проблемы с логистикой. 

Я не уверен. Чисто в теории любые астроциты производят ГАМК и имеют ГАМК рецепторы на себе. При том что глутаминдекарбоксилазы в них довольно немного в норме, но экспрессия может быстро возрастать или падать. Нормальные клетки астроцитов человека - идеальный вариант в плане модели. Скорее всего подошли бы также любые нормальные астроциты млекопитающих (тех же мышей). Не так репрезентативно, но один хрен ГАМК и глия до безумия консервативные и не должны разительно отличаться. Ну и мышиные астроциты часто используют как модель для исследований. 

А вот ко всяким опухолевым клеткам и иммортализированным линиям я бы относился с подозрением в плане таких исследований. Там и МТТ может показать совершенно другую токсичность, и результаты по ГАМК конечно кореляционные будут, но не нормальные колличественные. 

 

08.05.2023 в 14:43, фосолиф-кимих сказал:

Анализ на ГАМК можно делать ВЭЖХ с УФ детектором, но нужно дериватизировать, чтобы увеличить молярную экстинкцию

Да, я немного воскресил знания по теме. ВЭЖХ звучит как самый разумный подход из представленных. ИГХ можно достичь количественных результатов, но там хитрые методы с оптической плотностью на срезах тканей. Не ваш вариант) 

08.05.2023 в 14:43, фосолиф-кимих сказал:

но есть проблемы с логистикой. 

Сочувствую. Щас это в обе стороны сильно накрылось. Я наоборот хотел из РФ у знакомых всяких кастомных наночастиц заказать для исследований по клеточной смерти и в целом наладить сотрудничество двух ВУЗов своими ручками. А тут такие кранты)