Фотометрия глюкозы

[alexamio]

Нужно провести фотометрию глюкозы. Стоит заметить, что перед этим я провёл йодиметрическое титрование (пять проб), которое показало содержание глюкозы 99% в навеске.

 

В лаборатории имеется спектрофотометр, с этим проблем нет. Выбирал из антрона (в лаборатории он кончился :( ), пикриновой кислоты, карбазола и фенола и на первый раз решил выбрать фенол. И тут что-то пошло не так.

 

Сначала я сделал навеску своей глюкозы 0,025 г и навеску стандартной глюкозы 0,025 г. Растворил в 10 мл воды каждую и взял аликвоты 2 мл. Аликвоты установил на ледяную баню. К этим 2 мл добавил по 50 мкл фенольного раствора, приготовленного как 5,417 г фенола в 6 мл этанола. К полученной перемешанной смеси я добавил 5 мл заранее охлаждённой концентрированной серной кислоты, чтобы сахар не обуглился (до этого я пытался провести опыт без ледяной бани — получил концентрированно чёрную смесь). Все объёмы брались дозаторами.

 

Перемешанным растворам я дал отстояться полчаса и отнёс на спектрофотометр. Оптимальная длина волны в районе 600 нм (спектрофотометр установил 488 нм). Обнулил по смеси 2 мл воды с 50 мкл фенола и 5 мл серной кислоты, которая готовилась параллельно основным реакционным смесям исследуемого образца и стандарта. Однако результаты показали, что абсорбция света стандартом вдвое больше, чем образцом, который должен быть по крайней мере в районе 99%. Так что не так?

 

Мне кажется, что проблема может быть в приготовлении фенола. Либо я его неправильно растворяю, либо я его беру мало, либо ещё что-то.

[hurrem]

 

Оптимальная длина волны в районе 600 нм (спектрофотометр установил 488 нм).

 

Вот это странновато, 600 нм и 488 нм - это как бы разные диапазоны, при них совсем разная окраска получается.

 

А Вам принципиально именно по этой методике фотометрировать? Попробуйте другую

[Aminoxide]

Мое мнение, что дозаторами пользоваться не надо. Вы оперируете слишком малыми величинами. В этом случае величина статистической ошибки измерения превышает величину погрешности самого анализа.

 

С фенолом, растворимостью и его количеством разберетесь сами.

 

Предлагаю взять другие количества - например, навеску 2,5 г растворить на 100 мл воды и оттуда взять аликвоту 10 мл, которую тоже разбавить на 100 мл. Потом это разбавление учесть через формулу.

[alexamio]

Вот это странновато, 600 нм и 488 нм - это как бы разные диапазоны, при них совсем разная окраска получается.

 

А Вам принципиально именно по этой методике фотометрировать? Попробуйте другую

 

Опечтака: 500 нм, а не 600, извините.

 

Не принципиально. Попробую.

 

Мое мнение, что дозаторами пользоваться не надо. Вы оперируете слишком малыми величинами. В этом случае величина статистической ошибки измерения превышает величину погрешности самого анализа.

 

С фенолом, растворимостью и его количеством разберетесь сами.

 

Предлагаю взять другие количества - например, навеску 2,5 г растворить на 100 мл воды и оттуда взять аликвоту 10 мл, которую тоже разбавить на 100 мл. Потом это разбавление учесть через формулу.

 

А чем ещё пользоваться? Вручную набирать точные объёмы градуированными пипетками? Так это ещё большая ошибка, разве нет? Что есть такого точнее дозаторов? Я могу не знать, подскажите, пожалуйста.

 

С такими маленькими количествами уже показания самого спектрофотометра будут не очень точны, насколько мне известно. Опять же, могу ошибаться. Этот вариант то же попробую — авось поможет.

 

Вывод: буду разбираться с фенолом либо сменю метод.