Определение фруктозы в крови (по Рою)

[iran666]

у меня проблема с методикой приведенной ниже, подскажите пожалуйста что в ней может быть не так?

не происходит красно-коричневого окрашивания....

 

 

Определение фруктозы в крови (по Рою)

У здорового человека и крови содержится 0,1—0,5 мг% фруктозы.

Принцип. Фруктоза в присутствии концентрированной кислоты (соляной или серной) превращается в оксиметилфурфурол, который с резорцином образует соединение красно-коричневого цвета.

Реактивы. 0,1% раствор резорцина в 95% этиловом спирте,

30% раствор соляной кислоты.

10% раствор трихлоруксусной кислоты.

Ход определения. И пробирку, содержащую 1,8 мл дистиллированной воды, приливают микропипеткой 0,2 мл крови, трижды промывая микропипетку этой же водой. Оставляют па 10 минут. Прибавляют 1 мл 10% раствора трихлоруксуснои кислоты. Оставляют на 15 минут. Центрифугируют. Добавляют 2 мл 0,1% раствора резорцина и 3 мл 30% раствора соляной кислоты. Пробы тщательно перемешивают и ставят в водяную баню или термостат при 80° на 8 минут. Охлаждают холодной водой, оставляют на 5 минут и фотометрируют в фотоэлсктсоколориметре при зеленом светофильтре против контроля.

[neinkognito]

у меня проблема с методикой приведенной ниже, подскажите пожалуйста что в ней может быть не так?

не происходит красно-коричневого окрашивания....

 

 

Определение фруктозы в крови (по Рою)

У здорового человека и крови содержится 0,1—0,5 мг% фруктозы.

Принцип. Фруктоза в присутствии концентрированной кислоты (соляной или серной) превращается в оксиметилфурфурол, который с резорцином образует соединение красно-коричневого цвета.

Реактивы. 0,1% раствор резорцина в 95% этиловом спирте,

30% раствор соляной кислоты.

10% раствор трихлоруксусной кислоты.

Ход определения. И пробирку, содержащую 1,8 мл дистиллированной воды, приливают микропипеткой 0,2 мл крови, трижды промывая микропипетку этой же водой. Оставляют па 10 минут. Прибавляют 1 мл 10% раствора трихлоруксуснои кислоты. Оставляют на 15 минут. Центрифугируют. Добавляют 2 мл 0,1% раствора резорцина и 3 мл 30% раствора соляной кислоты. Пробы тщательно перемешивают и ставят в водяную баню или термостат при 80° на 8 минут. Охлаждают холодной водой, оставляют на 5 минут и фотометрируют в фотоэлсктсоколориметре при зеленом светофильтре против контроля.

 

1. Какой раствор не окрашивается? Только проба или же и раствор сравнения (т.е. р-р фруктозы). Если и тот и другой, то чаще всего виной явл. резорцин.

2. Какое время проходит после взятия крови и осаждением белков ТХУ? По правилам эта процедура проводится немедленно после взятия крови.

[iran666]

Калибровка с фруктозой тоже не окрашивается, однако качественная реакция с фруктозой по Селиванову, где использовался тот же резорцин идет нормально.

К кровь берется непосредственно перед определением.

[MNB]

Возможно, вопрос в том, как рассчитывать концентрацию соляной кислоты. Концентрированная соляная кислота - это водный раствор 36-38% (а не 100%). Но это просто предположение, с описанной методикой никогда не сталкивался.

[iran666]

у нас стандартная салянка 37%, 30% рассчитываем правильно, так что в этом причины быть не должно.