Электрофорез

[Lelishnna]

Пожалуйста, помогите, кто чем сможет)))
"При каком значении рН буферной смеси можно разделять белки и нуклеиновые кислоты методом электрофореза в полиакриламидном геле. Ответ обоснуйте. В чем особенность и достоинства метода?"

[Дельта]

Достоинстваhttp://550d.ru/10/519-metod-elektrofo-reza-v-poliakrilamidnom-gele.html( возможности изменения диаметра пор путем изменения концентрации мономеров во время полимеризации, а также в отсутствии ряда побочных явлений (электроосмос и др.),Полиакриламид химически инертен , достаточно прочен, чтобы вы­держать необходимые промывания и смены буфера.

Про рН буфера и обоснование(свойства глицина как проводника тока при щелочных рН):

Для проведения денатурирующего электрофореза в ПААГ используются различные буферные системы. Наиболее распространённая система, которая подразумевается по умолчанию — это буферная система Лэммли. Кроме того, в подавляющем числе работ используют, так называемый, disc-электрофорез (от англ. discontinous — разрывный) то есть используют гель, состоящий из двух частей. Концентрирующий гель имеет pH 6,8 и концентрацию полиакриламида от 2 до 8 %. Разделяющий гель имеет рН в районе 8,5-9 и концентрацию полиакриламида от 5 до 20 %. Выбор плотности геля зависит от молекулярных масс исследуемых белков. Все буферы не содержат неорганических солей, основным переносчиком тока в них является глицин. При рН 6,8 суммарный заряд молекулы глицина близок к нулю. Вследствие этого для переноса определенного заряда (который определяется силой тока в электрофоретической ячейке), отрицательно заряженные комплексы полипептидов с SDS должны двигаться с большой скоростью. При рН 8,8 глицин приобретает отрицательный заряд, вследствие чего на границе концентрирующего и разделяющего гелей белки резко тормозятся (в переносе одинакового заряда через единицу площади теперь участвует гораздо больше заряженных молекул, следовательно, они двигаются с меньшей скоростью). Результатом этого является концентрирование белков на границе гелей, что очень сильно повышает разрешающую способность метода.https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%AD%D0%BB%D0%B5%D0%BA%D1%82%D1%80%D0%BE%D1%84%D0%BE%D1%80%D0%B5%D0%B7_%D0%B1%D0%B5%D0%BB%D0%BA%D0%BE%D0%B2_%D0%B2_%D0%BF%D0%BE%D0%BB%D0%B8%D0%B0%D0%BA%D1%80%D0%B8%D0%BB%D0%B0%D0%BC%D0%B8%D0%B4%D0%BD%D0%BE%D0%BC_%D0%B3%D0%B5%D0%BB%D0%B5

ИЛИ ПОДРОБНЕЕ http://med.programx.ru/russlab_13_295_med-programx.html