Проблема с разделением смеси сахаров с помощью ТСХ

[Kathrine]

Встала задача количественно определить содержание сахарозы, фруктозы и глюкозы с помощьью ТСХ. Методику решили выбрать, как предложено в этой ссылке http://www.pccf.ru/otabake/differencirovannyy-analiz-izmeneniy-v-strukturah-uglevodnogo-i-kislotnogo-kompleksov-tabachnogo (у меня приготовленные растворы этих сахаров с концентрацией 0,7 г/л и их смесь в равной пропорции). Применялись пластинки Silufol, такие же древние, как в этой статье, фосфорномолибденовая кислота тоже далеко не первой свежести, растворители достаточно свежие. 

В результате эксперимента мои пластинки голубеют полностью, пятна индивидуальных веществ едва заметны (чуть темнее), а смесь не разделяется в принципе: пятно не размазывается, а ползет на уровне сахарозы. С чем такой результат может быть связан?
Или может кто-то посоветует другую методику? Позже по задумке надо разработать методы разделения и количественного определения в смеси не только сахаров, но и органических кислот, которые могут присутствовать в экссудатах ростков сои (растут стерильно на солевом составе, который и будет анализироваться). В литературе много упоминаний о том, что наличие неорганических солей может мешать разделению смеси сахаров, но на практике это утверждение еще не успела проверить.

[Дмитрий Подкопаев]

Пластинки голубеют полностью, потому что Вы их передерживаете при нагреве. Когда греешь в сушильном шкафу, нужно их вовремя вынуть, чтобы и пятна были видны, и пластинка не посинела полностью. Выложите фотки пластинок. В принципе лучше использовать УФ пластинки для ТСХ, тогда можно спокойно обойтись без фосфорномолибденовой кислоты и нагрева. Сахара будут гасить люминисценцию и будут видны в виде черных пятен. На табаке получалось качественное определение. Другая методика - это ВЭЖХ с колонками для сахаров и соответствующим детектором (УФ не пойдет). 

[Kathrine]

Пластинки голубеют полностью, потому что Вы их передерживаете при нагреве. Когда греешь в сушильном шкафу, нужно их вовремя вынуть, чтобы и пятна были видны, и пластинка не посинела полностью. Выложите фотки пластинок. В принципе лучше использовать УФ пластинки для ТСХ, тогда можно спокойно обойтись без фосфорномолибденовой кислоты и нагрева. Сахара будут гасить люминисценцию и будут видны в виде черных пятен. На табаке получалось качественное определение. Другая методика - это ВЭЖХ с колонками для сахаров и соответствующим детектором (УФ не пойдет). 

Спасибо за пояснение

 А если на этих пластинках использовать другой проявитель, чтобы их можно было посмотреть в УФ? Колонок у нас нет,только такие пластины...

[Дмитрий Подкопаев]

Выбор проявителя та еще история! Серку нельзя, т.к. растворит пластинки. Нужно что-то, что реагирует с альдегидной группой сахаров с образованием окрашенных соединений. Разрешение на Ваших пластинах очень плохое. Может воды нахватали из воздуха? Наши хранились в запечатанных пакетах. Попробуйте предварительно прогреть пластины при 120 градусах, может поможет.