Разделение белков

[msjulianovna]

Здравствуйте! Будьте добры, помогите, пожалуйста, с заданием и с моим возникшим противоречием.

 

1) Определить, какой белок будет адсорбироваться при пропускании через колонку с катионитом ацетатного буфера (pH=3,72), содержащего белки:

1) пепсин (pI=2,0);

2) казеин (pI=4,6).

 

Я рассуждала так: если в колонке катионит, значит, он должен адсорбировать катионы, то есть сам заряжен отрицательно (протон диссоциирует). Тогда получается, что он должен взаимодействовать с положительно заряженными белками. А таковыми будут те, что являются более щелочными, то есть менее кислыми - казеин (pI=4,6).

 

Скажите, пожалуйста, правильно ли так выполнить задание? Просто не очень понимаю,какой смысл в буферном растворе и что представляет собой весь этот механизм разделения веществ.

 

2) И еще одно противоречие, касаемо хроматографии. С одной стороны, при бумажной (как пример) хроматографии вещества более полярные должны связываться с этой твердой фазой и медленнее передвигаться по хроматографической бумаге. Но с другой стороны, согласно правилу Дюкло-Траубе, вещества с более длинным углеводородным радикалом будут лучше адсорбироваться. И каким тогда образом определить (по отношению к аминокислотам, например) какая из них будет медленнее выходить - та,у которой больше полярных групп или та, у которой меньше углеводородный скелет?

 

Помогите, пожалуйста!

[chemist-sib]

Доброго времени суток! Последней (впрочем, и первой - тоже) надеждой каждого человека должна быть надежда на собственные силы. Я видел эту вашу тему, но, поскольку, не считал себя в таких вопросах особо компетентным, чтобы что "вслух" произносить - помалкивал. Да и, если совсем честно - лень было. Если по прочтении всего этого у вас еще осталась надежда услышать от меня что-то путнее - то вот оно такое. Катионит в колонке будет поглощать только положительно заряженные частицы, все остальное через него просто "провалится" с потоком растворителя. Поэтому нужно рассматривать, какой заряд будет на каждом конкретном белке (со своим показателем изоэлектрической точки) в данном буфере (со своим рН). Я так понимаю, что по одну сторону от рН=рI белок будет диссоциировать как кислота, по другую - как замещенный амин. Вот и нужно определить, какой из этих вдух белков протонируется по аминогруппе. С этим - разберетесь? Когда-то, от одного из первых своих универовских преподавателей я услышал мудрую фразу: "Студент, идущий на экзамен по конкретной химической специальности, знает ее лучше, чем кандидат химических наук, десять лет работающий по другой специальности. А я - даже не кандидат, да и закончил универ ровно 30 лет тому назад...  

Теперь - про бумажную хроматографию. Она, в отличие от тонкослойной - хотя и представляющая практически то же самое - отличается в принципе: она - распределительная - между водой, всегда адсорбированной бумагой и гидрофобной подвижной фазой. ТСХ - в системе твердый адсорбент-ЖФ. Поэтому, в БХ определяющим будет (ИМХО!) гидрофильность вещества - чем меньше, тем больше Rf, а в ТСХ - полярность (тоже ИМХО!) - способность "ухватиться" за полярные ОН-,(-О-)-группы.

Успехов! 

[msjulianovna]

Доброго времени суток! Последней (впрочем, и первой - тоже) надеждой каждого человека должна быть надежда на собственные силы. Я видел эту вашу тему, но, поскольку, не считал себя в таких вопросах особо компетентным, чтобы что "вслух" произносить - помалкивал. Да и, если совсем честно - лень было. Если по прочтении всего этого у вас еще осталась надежда услышать от меня что-то путнее - то вот оно такое. Катионит в колонке будет поглощать только положительно заряженные частицы, все остальное через него просто "провалится" с потоком растворителя. Поэтому нужно рассматривать, какой заряд будет на каждом конкретном белке (со своим показателем изоэлектрической точки) в данном буфере (со своим рН). Я так понимаю, что по одну сторону от рН=рI белок будет диссоциировать как кислота, по другую - как замещенный амин. Вот и нужно определить, какой из этих вдух белков протонируется по аминогруппе. С этим - разберетесь? Когда-то, от одного из первых своих универовских преподавателей я услышал мудрую фразу: "Студент, идущий на экзамен по конкретной химической специальности, знает ее лучше, чем кандидат химических наук, десять лет работающий по другой специальности. А я - даже не кандидат, да и закончил универ ровно 30 лет тому назад...  

Теперь - про бумажную хроматографию. Она, в отличие от тонкослойной - хотя и представляющая практически то же самое - отличается в принципе: она - распределительная - между водой, всегда адсорбированной бумагой и гидрофобной подвижной фазой. ТСХ - в системе твердый адсорбент-ЖФ. Поэтому, в БХ определяющим будет (ИМХО!) гидрофильность вещества - чем меньше, тем больше Rf, а в ТСХ - полярность (тоже ИМХО!) - способность "ухватиться" за полярные ОН-,(-О-)-группы.

Успехов! 

Спасибо Вам! Попробую разобраться!