Нужна помощь с анализом результатов гель-проникающей хроматографии.

[Antalia]

Здравствуйте. Проанализировали образец, выделенный из зерна, предположительно содержащий много бета-глюканов (полисахаридов) и немного белка. График и таблицу прикрепляю. Использовали два детектора: RID и DAD. График по DAD на длине волны 280 нм, где, насколько я понимаю, поглощают белки. RID, насколько я понимаю, показывает всё, что есть в образце. По логике мы смотрим, что показывается на DAD, и считаем, что всё остальное, представленное на RID, это полисахариды. Но таким образом получается, что большая часть (около 58%) это белки... Причем в образце были определены белки методом Кьельдалля, там их оказалось около 2%. 

[chemist-sib]

Т.е., вариант - с очень разнящимся откликом детекторов на разные (очень разные!) компоненты матрицы - вообще не рассматривается?..

[Antalia]

В 01.07.2024 в 16:07, chemist-sib сказал:

Т.е., вариант - с очень разнящимся откликом детекторов на разные (очень разные!) компоненты матрицы - вообще не рассматривается?..

Можете, пожалуйста, поподробнее объяснить? буду очень благодарна!

[chemist-sib]

Попробую. Но поскольку я ни разу не работа с рефрактометрическим детектором, да и пептиды (и аминокислоты) рассматривал до сих пор только как досадные помехи к нашим аналитам на обращенно-фазной ВЭЖХ, то дальше пойдут только самые общие соображения (точнее - пока только предположения. Подтверждать или опровергать их - дело хозяйское). Для качественной идентификации компонентов те рассуждения, с которых вы начали, вполне годятся. А вот при переходе к оценке концентраций - да, рефрактометр - детектор универсальный, и реагирует на все. Но если в конкретном аналите не содержится (или маловато) групп, вносящих существенный вклад в ПП - стажем, нет ароматики, линейных двойных связей, да еще и сопряженных, гетероатомов и т.д... - отклик детектора будет минимальным. Если есть чистые (стандартные) образцы интересующих вас аналитов - введите их одинаковые концентрации и определитесь с реакцией детектора, можно будет потом ввести коэффициент относительной чувствительности и, уже с его учетом, переходить от отношения площадей (высот) пиков к реальным отношениям концентраций аналитов в матрице.