Алкалоиды чемерицы: особенности экстракции и количественного определения в лекформах и сырье

[chemist-sib]

Выполняю обещанное.

 

Итак, вся работа Т.В.Мироновой делалась на вератрине - сумме алкалоидов, выделенных из семян сабадиллы; основные его компоненты - цевадин и вератридин . Автору было просто - у нее был флакончик мерковского стандарта, купленный за закордонные деньги, с соответствующей этикеткой (мы же в таких случаях извлекаем все ту же чемеричную воду ex tempore). В чемерице Лобеля и других видах чемериц содержатся подобные, но вроде бы немного другие алкалоиды - иервин, рубииервин, изорубииервин, псевдоиервин, протовератрин А, вератроилзигаденин. Если такие разночтения относительно того, что в конечном итоге здесь будет измеряться, Вас не смущает - продолжим.

Количественное определение вератрина проводят экстракционно-фотометрическим методом, основанным на образовании окрашенного комплекса вератрина с красителем 0 бромфеноловым синим в хлороформе при рН 2,0. Для построения калибровочного графика 0,1 гн вератрина-основания растворяли в 0,1 н. растворе соляной кислоты в мерной колбе вместимостью 100 мл (раствор А). Помещали 5 мл полученного раствора в колбу вместимостью 50 мл и добавляли 0,1 н. раствор соляной кислоты (раствор Б). Определенные объемы (0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мо) раствора Б и от 0,2 до 0,5 мл раствора А вносили в делительные воронки, добавляли ацетатно-формиатный буфер до 10 мл, прибавляли 2 мл 0,1% водного раствора бромфенолового синего и 10 мл хлороформа. Содержимое воронок энергично встряхивали в течение 3 мин. После разделения фаз хлороформные растворы отделяли и оптическую плотность растворов измеряли при 410 нм относительно хлорфоормного экстракта реактивов. Подчинение светопоглощения закону Бера наблюдалось в интервале 5-50 мкг/мл. Чувствительность метода 2 мкг/мл. Погрешность метода не превышает +/- 3%.

Само количественное определение проводят аналогично описанному при построении графика.

Возможность прямого УФ-СФМ-определения описана применительно к иервину. Максимумы абсорбции его для этанольных растворов в области 250-253 нм (удельный коэффициент поглощения - 265) и 253-255 нм - для солянокислых растворов (удельный коэффициент поглощения - 230,5). Изорубииервин и вератроилзигаденин подобно многим другим вератровым алкалоидам не обладают характерными спектрами абсорбции в УФ-области спектра.

Еще немного про экстракцию вератрина:

1. На процесс экстракции вератрина существенное влияние оказывают природа растворителя и рН среды. Лучшим экстрагентом является хлороформ. Можно также успешно использовать этилацетат и смесь хлороформ-этилацетат-метанол 3:1:1. Оптимальное значение рН 10,0. Натрия сульфат повышает экстракцию вератрина.

2. Для очистки вератрина т экстрактивных веществ целесообразно использовать однократную экстракцию эфиром, петролейным эфиром или гексаном при рН 2,0 в отсутствие электролита.

 

Все вышеприведенное взято из следующих опубликованных работ:

1. Информационное письмо Главного судмедэксперта МЗ СССР "Судебно-химическое определение вератрина в трупном материале". М., 1987;

2. Миронова Т.В. Экстракционно-фотометрическое определение вератрина. - Фармация.-1983.-№ 2.-С.48-50;

3. Миронова Т.В. Изучение условий экстрагирования вератрина из водных растворов. - Фармация.-1983.-№ 3.-С.22-24.

 

Небольшой мой комментарий: образование окрашенных комплексов с кислотными красителями, экстрагируемых в гидрофобный растворитель - общее свойство веществ основного характера. С этой точки зрения, ЭФ - тоже не самый специфический метод определения. Хоть условия определения подобраны специально для вератрина, они прекрасно могут подойти и для великого множества других алкалоидов. Однако, он не будет реагировать на неорганические кислоты и щелочи (в отличие от обычного кислотно-основного титрования). Проблемы с чистым стандартом для построения графика можно обойти, если применить этот метод в качестве относительного - просто посмотреть - действительно ли у Вас существенно меняется выход алкалоидов, или врет конечное титрование. Да и в дальнейшем это определение можно поставить относительно некоей "стандартной" чемеричной настойки (устраивающей все контролирующие инстанции).

Успехов!

[Наталья 1967]

К сожалению, я не знаю Вашего имени. Премного благодарна Вам! Обязательно воспользуюсь Вашей подсказкой.
У нас в лаборатории получается "чудо" какое-то с настойкой и водой. Допустим, смешивают две настойки с содержанием действующих веществ 0, 15% и 0, 17%, а в смешанной получается 0,19%???? Или методика врет, или химики (хотя химики в лаборатории этим методом уже владеют лет 10 как минимум), или дело в технологии. У нас есть еще предположение, что на результат может влиять попадание аммиачного слоя (даже капля) в хлороформное извлечение, правда потом идет выпаривание извлечения....
В любом случае, низко кланяюсь!)

Изменено 10 Мая, 2017 в 05:33 пользователем alkopnin

[chemist-sib]

Наталья, попадание любого иного вещества, обладающего кислотно-основными свойствами, в конечный сухой остаток, ес-но, будет вносить дополнительную неконтролируемую погрешность в определение. Тот же "проскок" воды через безводный сульфат натрия с каким-то количеством хлорида аммония может исказить результаты титрования. По идее, точное и единообразное выполнение всех процедур экстракции и очистки, а также контроль (тот же самый спирт, но без чемерицы - надеюсь, именно так Вы делаете? Извлекая вместо настойки чемерицы раствор спирта такой же концентрации?), должны свести к минимуму такую погрешность, но - всяко бывает... Еще такая мысль: оксид алюминия очищает экстракт от всякой гадости соэкстрактивной, достаточно полярной. Если он не той степени активности (ну, наглотался влаги при хранении, например), то он будет не то "хватать". Если попробовать заменить такую колоночную фронтальную хроматографию экстракционной очисткой гексаном (или диэтиловым эфиром) из кислой водной фазы, перед подщелачиванием? Алкалоиды туда точно не уйдут.

В конце - раскланиваюсь в ответ. Такой вот "обмен светскими манерами"!

Изменено 5 Мая, 2012 в 13:28 пользователем chemist-sib

[Наталья 1967]

Наталья, попадание любого иного вещества, обладающего кислотно-основными свойствами, в конечный сухой остаток, ес-но, будет вносить дополнительную неконтролируемую погрешность в определение. Тот же "проскок" воды через безводный сульфат натрия с каким-то количеством хлорида аммония может исказить результаты титрования. По идее, точное и единообразное выполнение всех процедур экстракции и очистки, а также контроль (тот же самый спирт, но без чемерицы - надеюсь, именно так Вы делаете? Извлекая вместо настойки чемерицы раствор спирта такой же концентрации?), должны свести к минимуму такую погрешность, но - всяко бывает... Еще такая мысль: оксид алюминия очищает экстракт от всякой гадости соэкстрактивной, достаточно полярной. Если он не той степени активности (ну, наглотался влаги при хранении, например), то он будет не то "хватать". Если попробовать заменить такую колоночную фронтальную хроматографию экстракционной очисткой гексаном (или диэтиловым эфиром) из кислой водной фазы, перед подщелачиванием? Алкалоиды туда точно не уйдут.

В конце - раскланиваюсь в ответ. Такой вот "обмен светскими манерами"!

А вот со спиртом мы делаем контрольный опыт только на стадии уже титрования, не извлекая из него ничего....Короче, после праздников будет чем заняться.) Приятных Вам выходных!

[docanton]

А у кого-нибудь есть методика выделения (изолирования) стероидных алкалоидов чемерицы Лобеля из растительного сырья?

Правильно ли я методику создала выделения стероидных алкалоидов:

Для экстракции искомых веществ использовали воздушно-сухое сырьё растительных организмов. Сырьё измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм. Сырьё полностью заливали водой очищенной до зеркальной поверхности, подкисляли до рН=2 по универсальному индикатору 3 % раствором кислоты серной. Сырьё настаивалось в кислой среде в течение 48 ч. После настаивание кислое водное извлечение фильтровалось через бумажный фильтр. Шрот сырья повторно заливалось водой очищенной до зеркальной поверхности и подкисление повторялось. Шрот повторно настаивался в течение 48 ч, затем фильтровалось через бумажный фильтр. Оба фильтрата объединялись. Затем надосадочную жидкость подщелачивали 25 % водным раствором аммиака до рН = 9 по универсальному индикатору. Выпавший осадок оснований СА отфильтровывали через бумажный фильтр. Высушивали в сухо-жаровом шкафу при температуре 40 ℃ в течение 1 ч.

[aversun]

В советское время будучи в экспедициях часто приходилось работать с лошадьми. Чемерица у нас произрастает повсеместно и в больших количествах (Камчатка), едешь на лошади, смотришь, а она нет-нет да и прихватит стебель другой этой травы, благо она высокая и наклоняться не надо. Сначала пытался вырывать у нее изо рта стебель, а потом махнул рукой, пусть жрет, ей виднее. Вероятно на лошадей токсины чемерицы действуют слабо. Чемерица у нас одно из первых растений, которые бойко вылезают после схода снега.

 

Изменено 8 Мая, 2017 в 08:55 пользователем aversun

[040500]

Контроль надо делать с самого начала с добавления 1% соляной кислоты в такую же массу дистиллированной воды и проходить все стадии, уж слишком они материально затратные на потери алкалоидов. В результате контрольное значение оказывается меньше ожидаемого и ваши результаты анализа завышаются.

[docanton]

А может использовать метод Крамаренко для изолирования стероидных алкалоидов из растительного сырья? Крамаренко изучал влияние рН среды на извлекаемость алкалоидов. А стероидность молекулы никак не влияет на выбор метода и эатпность анализа?

Метод Крамаренко в чистом виде:

 

·        Настаивание измельченного объекта с водой, подкисленной 20 % раствором серной кислоты до рН = 2-3, в течение двух часов. Вода берется в количестве 1:2 по отношению к навеске объекта. Водное извлечение фильтруется. Операция повторяется двукратно;

·        Очистка водного извлечения от белковых соединений путем  насыщения его сульфатом аммония, настаивания в течение часа и фильтрования образовавшегося осадка;

·        Очистка фильтрата от жиров, смол, пигментов путем экстракции эфиром. Эфирное извлечение отбрасывают;

·        Подщелачивание водного извлечения 20 % раствором гидроксида натрия и экстрагирование веществ основного характера хлороформом при pН = 9-10 (трехкратная экстракция), отделение органической фазы и концентрирование полученного извлечения упариванием.

[chemist-sib]

Методы, в т.ч. и уже описанные здесь Вами, можете использовать любые: принципиально они мало чем отличаются. А вот чтобы показать, какие из них - чем-то лучше других - таки придется делать и количественный анализ (или экстрационно-фотометрически, или спектрофотометрически), и приуидывать материальные и временные затраты на "единицу суммы алкалоидов". Далее - банальная (но, тем не менее, и самая трудная) "задача на оптимум"... 

[Гость alkopnin]

Название темки поправил, и немного почистил. Был в отъезде в ЗАТО Саров - оперативно смотреть за форумом не получалось(