Реакция EDC и NHS друг с другом в воде без присутствия карбоновой кислоты

[Miriada]

Я не специалист, но, вероятно, все работает и QD с исулином держатся вместе только благодаря хитозану. 

[Miriada]

В 27.06.2025 в 09:53, Loiso Pondohva сказал:

Да и устойчивость к гидролизу в жкт - не самая удивительная для небольших белков вещь.

Нет, инсулин моментально разрушается в ЖКТ - это одна из причин, по которой инсулина в таблетках до сих не существует - по всей видимости, хитозан хорошо защищает этот инсулин. Собственно, все написано в той статье. 

Изменено 27 Июня, 2025 в 02:47 пользователем Miriada

[Loiso Pondohva]

В 27.06.2025 в 02:35, Miriada сказал:

Я не специалист, но, вероятно, все работает и QD с исулином держатся вместе только благодаря хитозану. 

Я если что пока наискосок статью прошёлся, более медицинским взглядом, чем химическим (на химический у меня сейчас оперативки не хватит), что именно меня там смутило в их методологиях.

Понятно, что ваше дело - технологическое в данный момент, а не научное, и вам надо думать о более прикладной вещи))

Но чём меня правда очень очень смущает в тех механизмах, что они рисуют. Будто они сами не очень понимают как именно это работает.

Потом чуть более подробно попробую отсмотреть их химию и графики, может я зря бомбанул.

 

[Miriada]

В 27.06.2025 в 10:45, Loiso Pondohva сказал:

Я если что пока наискосок статью прошёлся, более медицинским взглядом, чем химическим (на химический у меня сейчас оперативки не хватит), что именно меня там смутило в их методологиях.

Понятно, что ваше дело - технологическое в данный момент, а не научное, и вам надо думать о более прикладной вещи))

Но чём меня правда очень очень смущает в тех механизмах, что они рисуют. Будто они сами не очень понимают как именно это работает.

Потом чуть более подробно попробую отсмотреть их химию и графики, может я зря бомбанул.

 

Авторы этой технологии - биологи, не химики. 

[Loiso Pondohva]

В 27.06.2025 в 02:43, Miriada сказал:

Нет, инсулин моментально разрушается в ЖКТ - это одна из причин, по которой инсулина в таблетках до сих не существует - по всей видимости, хитозан хорошо защищает этот инсулин. Хотя в статье они говорят о хитозан-глюкозном кополимере, но их ЯМР спектр в Nature указывает прсто на смесь хитозана и низкомолекулярной глюкозы. По их методике кополимер между глюкозой и хитозаном не получить. Более того, я все проверяла с помощью DOSY NMR, эксперименты показывают, что эта глюкоза не связана ковалентно, а просто осталась после диализа. 
 

Но они заявляют, что именно благодаря такому кополимеру, этот инсулин умный - он высвобождается, только если уровень глюкозы в крови высокий

Сам инсулин человека - разумеется не устойчив
А какой-нибудь IGF-1 и подобные ему - кратно устойчивее к пепсину и даже немножко перорально доступны. (чуууть-чуть)
Ацилированные аналоги инсулина - туда же, если мне память не изменяет
А если навесить какой-нибудь антипептидазный кусок-вообще красота.

Так что не было бы большим чудом, если бы ваша фракция оказалась также достаточно устойчива) 
Можете же сами проверить её, без наночастиц, пепсином тем же, потом трипсином. И сравнить с рефрентным чистым инсулином по времени жизни. 

Хитозан - действительно одна из долгосрочно используемых стратегий в подходе протаскивания инсулина и других уязвимых пептидов по жкт. Тут вопрос к вам, они реально таки держатся друг за друга, или нет, в той частице что получается?

 

 

В 27.06.2025 в 02:49, Miriada сказал:

Авторы этой технологии - биологи, не химики. 

Именно это меня и смущает. Значит электронный микроскоп пофоткать структуру красивых QD и написать 10 раз насколько они на самом деле не токсичные - у них были деньги и время, а вот нужные биологические анализы сделать - не было
 

В 27.06.2025 в 02:43, Miriada сказал:

Но они заявляют, что именно благодаря такому кополимеру, этот инсулин умный - он высвобождается, только если уровень глюкозы в крови высокий

Как я и написал. Механизм - безумно элегантный. Это круто. ЕСЛИ он таки работает.
Плюс это не совсем "настолько" умный кополимер. Может я конечно слепой на ночь глядя, но про умение "считывать глюкозу крови" там ни слова. Там про механизм его защиты в желудке, и постепенного высвобождения в 12-пёрстной b-глюкозидазой. Что как бы круто, но будет идти независимо от Glu крови.
Они конечно ссылаются на "it was demonstrated that the β-glucosidase chemical activity directly correlates with glucose concentrations" 
-В чужой статье 

Но почему из графиков тогда у бабуинов глюкоза снижается равномерно и продолжает снижаться при гипогликемии? Ааааа
Надо спать, может с свежей головой буду менее злой хД
И надо чуть подробнее глянуть математику. Может не так равномерно как кажется
____
К вам тут вообще 0 претензий. Мне искренне интересно что у вас получится и как оно окажется на самом деле! 

Просто я становлюсь слегка деспотичным и дотошным если речь заходит конкретно о биологических и медицинских методологиях)

 

Изменено 27 Июня, 2025 в 01:33 пользователем Loiso Pondohva

[Miriada]

В 27.06.2025 в 11:14, Loiso Pondohva сказал:

Хитозан - действительно одна из долгосрочно используемых стратегий в подходе протаскивания инсулина и других уязвимых пептидов по жкт. Тут вопрос к вам, они реально таки держатся друг за друга, или нет, в той частице что получается?

Хитозан точно покрывает и скрепляет все компоненты, включая QD, инсулин, его побочные модификации с EDC, мелкие примеси, в том числе следовые количества  NHS и EDU - я уже идентифицировала их и провела количественное определение. 
 

Но вот прикреплен ли этот инсулин к QD ковлентно, не понятно. Опять же контрольный эксперимент без и с QD показыват, что разницы-то большой и нет. Концентрация инсулина, который детектируется HPLC UV, на 6% выше без QD (то есть EDC/NHS-опосредованная конъюгация имеет крайне низкую эфффективность (1-5%) либо вообще не работает. 

Кстати у них в Nature статье приведены SEM изображения, там видно, что в образцах в основном присутствуют частицы глобуллярного инсулина (много серых точек), и среди них можно увидеть буквально пару ярких точек (QD), вокруг которых есть инсулин, но это не знаит, что он ковалентно привязан - вообщем, даже данные из этой статьи указывают на очень низкую эффективность конъюгации - другое дело, что она кажется и не нужна, чтобы композит работал против диабета первого типа. 

Изменено 27 Июня, 2025 в 01:55 пользователем Miriada

[Loiso Pondohva]

@MiriadaВозможно (если будет время) я бы написал им в Сиднейский институт (или лично Victoria Cogger в её ANZAC, у меня вроде как есть на неё выход) с некоторыми уточнениями, со своей учебной почты или анонимно
 
Потому что у меня есть пару вопросов, которые скорее всего останутся, даже если я полностью разберусь в их методологии, с точки зрения людской медицины (мне это оч интересно потому что может быть я снова вернусь к таргету)
Можно ли будет сослаться и на некоторые закономерности и несостыковки в ваших данных, или это пока ноу-хау, которое за пределами русских форумов лучше не распространять? 
И если да, то каким образом это лучше сделать для вас?

В 27.06.2025 в 03:49, Miriada сказал:

что она кажется и не нужна, чтобы композит работал против диабета первого типа

Вот вот!)
 

Изменено 27 Июня, 2025 в 02:00 пользователем Loiso Pondohva

[Miriada]

В 27.06.2025 в 11:55, Loiso Pondohva сказал:

@MiriadaВозможно (если будет время) я бы написал им в Сиднейский институт (конкретно Victoria Cogger, у меня вроде как есть на неё выход) с некоторыми уточнениями, со своей учебной почты или анонимно?
 
Потому что у меня есть пару вопросов, которые скорее всего останутся, даже если я полностью разберусь в их методологии, с точки зрения людской медицины (мне это оч интересно потому что может быть я снова вернусь к таргету)
Можно ли будет сослаться и на некоторые закономерности и несостыковки в ваших данных, или это пока ноу-хау, которое за пределами русских форумов лучше не распространять? 

Нет, распространять мои данные за пределами русских форумов нельзя.

Я этих людей лично знаю, и они знают об этих результатах. Собственно, они и хотят уменьшить количество примесей  
Исследования продолжаются. У всех очень много вопросов - но ключевая вещь здесь - вещество работает - я могу его изучать, но менять нельзя. 

Могу передать Ваши вопросы авторам - так будет быстрее 

Изменено 27 Июня, 2025 в 02:06 пользователем Miriada

[Loiso Pondohva]

В 27.06.2025 в 04:00, Miriada сказал:

Нет, распространять мои данные за пределами русских форумов нельзя.

Я этих людей лично знаю, и они знают об этих результатах. Собственно, они и хотят уменьшить количество примесей  
Исследования продолжаются. 

АЫААЫЫЫААЫ окей!

[Miriada]

Если честно, я не проверяла биологическую часть этой статьи - передо мной стояла и стоит конкретная задача. И все было нормально, пока я не обнаружила и не доказала, что в композите есть две инсулиновые модификации и обе появляются из-за EDC.

И, если посмотреть на мои результаты, можно видеть, что и проблема-то решена, но наночастицы стали высаживаться из раствора и аггрегровать, когда я уменьшила загрузки NHS и EDC, хотя, может, это из-за того, что я стала добавлять NHS первым. 

Странные вещи с диализом происходят, концентрация двух инсулиновых модификаций увеличивается! 

В общем, закономерности прослеживаются, но пока не могу собрать пазл - какая-то невероятная смесь! 

Изменено 27 Июня, 2025 в 02:13 пользователем Miriada