Неорганический фосфат в реакционной смеси. Как избавиться?

[DinaBurko]

Уважаемые химики! Может быть кто-нибудь из Вас сталкивался с проблемой удаления из реакционной смеси неорганического фосфата, который является побочным продуктом данной реакции и влияет на сдвиг равновесия ее в сторону изначальных веществ? Дело том, что я занимаюсь синтезом динуклеотид-полифосфатов с помощью генно-инженерных ферментов. В результате данной реакции образуется неорганический фосфат, который мешает получению целевого продукта (динуклеотид-полифосфата). Мне необходимо как-нибудь от него избавиться. Мне известно, что, как правило, для этих целей используют хлорид бария, который связывается с фосфатом, образуя нерастворимую соль, но тот же хлорид бария способен связываться и с фосфатом моих динуклеотид-полифосфатов, поэтому, возможно, данный способ не подходит.

Заранее спасибо. (к сожалению, я не химик, простите, может, за глупый вопрос)

[Himeck]

не уверен насколько это уместно, может осмотически вытянуть фосфат?

[Airflex]

может это конечно полный бред, но если попробовать поискать возможность синтеза в гетерофазной системе вода-растворитель( например какой-нибудь органический фосфат...) Могу предположить что неорганический монофосфат будет уходить из зоны реакции в водную фазу....

[DinaBurko]

не уверен насколько это уместно, может осмотически вытянуть фосфат?

Спасибо за ответ. Не знаю, поняла ли я Вас правильно, вы имеете в виду диализ? Но у нас в наличие имеются диализные мешочки, размер пор который достаточно большой, чтобы мой продукт в виде динуклеотид- фосфатов в них задерживался

[Himeck]

да, я про диализ. не знаю какой размер у Ваших динуклеотидов, может тогда по-старинке? самодельный мешочек из мочевого пузыря рыб, кишечника птиц, коллодия.

кстати, гель-электрофорез там никак не приспособить?

[DinaBurko]

может это конечно полный бред, но если попробовать поискать возможность синтеза в гетерофазной системе вода-растворитель( например какой-нибудь органический фосфат...) Могу предположить что неорганический монофосфат будет уходить из зоны реакции в водную фазу....

Спасибо Вам за ответ. Но скорее всего ничего не выйдет, ведь все компоненты реакционной смеси очень хорошо растворимы в воде, а также мои "живые" ферменты могут просто инактивироваться. Но идея очень хорошая, попробую все же что-нибудь придумать. Спасибо.

 

да, я про диализ. не знаю какой размер у Ваших динуклеотидов, может тогда по-старинке? самодельный мешочек из мочевого пузыря рыб, кишечника птиц, коллодия.

кстати, гель-электрофорез там никак не приспособить?

Спасибо . Молекулярная масса моего динуклеотида около 800 г/моль.

[Airflex]

Спасибо Вам за ответ. Но скорее всего ничего не выйдет, ведь все компоненты реакционной смеси очень хорошо растворимы в воде, а также мои "живые" ферменты могут просто инактивироваться. Но идея очень хорошая, попробую все же что-нибудь придумать. Спасибо.

Если компоненты хорошо растворимы в воде-это еще не значит что они будут находиться в воде и при наличии органической фазы. Здесь уже нужно думать о коэффициенте экстракции данного вещества конкретно выбранным растворителем(можно определить опытным путем, если соединение можно определить количественно титрованием).

С диализом тоже можно порядком намучится! Например проблемы могут возникнуть с осмосом.....

Поэтому советую провести хотябы поверхностный литературный поиск: вдруг по этой теме будет информация.

[DinaBurko]

Если компоненты хорошо растворимы в воде-это еще не значит что они будут находиться в воде и при наличии органической фазы. Здесь уже нужно думать о коэффициенте экстракции данного вещества конкретно выбранным растворителем(можно определить опытным путем, если соединение можно определить количественно титрованием).

С диализом тоже можно порядком намучится! Например проблемы могут возникнуть с осмосом.....

Поэтому советую провести хотябы поверхностный литературный поиск: вдруг по этой теме будет информация.

[/quote

Вы знаете, я тоже об этом думала. действительно можно подобрать органический растворитель в котором растворимость компонентов реакционной смеси лучше, чем в воде, но все же все упирается в способность ферментов сохранять свою активность в орг. фазе. Большое спасибо. я все же попробую.

[serty]

Стоит попробовать ГПХ(гель-проникающую хроматографию) с минимальными размерами пор, но это только для очистки - фермены вы отделите наверняка.

[Бухалыч]

Может высадить фосфат MgCl₂ + NH₃ 1:1 (только с разб., например 0,5 М растворами), а нуклеотиды и впрямь экстрагировать?