Проба Гоппе-Зейлера (или определение карбоксигемобоглобина крови)

[Stalker209]

Добрый вечер, господа химики!

 

Недавно прочитал в учебнике по токсикологической химии про т.н. пробу "Гоппе-Зейлера". Уже давно хочу её сделать, но возникают следующие трудности.

 

1) Не могли бы вы подробнее рассказать методику, так как в учебнике она онписана в общих чертах (с расчётом на знающего человека). Знаю лишь вот что:

"определённый объём крови, обработанный консервантом (в моём случае - цитрат Na) разводят 1:100 (в другой литературе видел цифру 1:1, что насторожило)и приливают гидроксит натрия. Если кровь насыщена CO.Hb, то цвет её остаётся таким же, если содержание карьбоксигемоглобина нормальное - кровь буреет. Всё-таки 1:1 или 1:100 (разница-то существенная) и как правильно обработать кровь консервантом (какой должен быть раствор, в каком соотношении приливать)?

 

2) Я думаю, все были на общем клиническом анализе крови (это когда из безымянного пальца берут). Как называется иголка - скарификатор - я уже знаю. Теперь мучает другой вопрос: как называется такая штука, похожая на стержень авторучки прозрачной с частыми делениями для измерения объёма забираемой крови? Друзья подсказали, что это пипетка-дозатор, но не уверены на 100%. И где её взять? а то как-то неудобно измерять объём крови инсулиновым шприцем.

 

Заранее извиняюсь за глупость вопроса и количество букафф. С уважением и благодарностью за ответы.

 

Stalker209

[Stalker209]

Дополню: видел в энциклопедии пробу Гоппе-зейлера, но всё равно остались вопросы: "к определённому объёму крови" - что за объём?

Как кровь консервировать, как разбавлять и как называется "стержень от авторучки"

[chemist-sib]

Доброго времени суток, коллега Stalker209.

Для начала: практически все химические пробы на карбоксигемоглобин в крови имеют сейчас только исторический интерес, ибо они: малочувствительны (говоря традиционным химчески языком - открываемый минимум COHb - ориентировочно - процентов 20), субъективны (в связи с особенностями восприятия оттенков и цветов) и не очень специфичны (особенно когда кровь изменилась под влиянием высокой температуры или гниения). На практике применяются крайне редко.

Теперь к вопросам: тот "стержень" - действительно, пипетка. Вполне возможно, у нее есть и свое персональное имя, но это не меняет сущности названия. Берут - в лаборатории или в магазине, торгующем лабораторной техникой/посудой. Но никакого греха не будет, если вы станете отмерять объем жидкости и инсулиновым шприцем - кстати, очень удобно, или каплями из обычной аптечной пипетки. Про разбавление: на самом деле - не принципиально, все делается исключительно для того, чтобы исследователь уловил измненение цвета. Поэтому такие исследования обязательно ставятся параллельно с двойным контролем: отрицательным (кровь, не содержащая COHb) и положительным (кровь с хорошей концентрацией COHb). Изменение цвета в исследуемой пробе тогда вполне понятно. Хотите "поиграться" - забегите на кухню, когда кто-нибудь на ней собирается готовить печенку, слейте с нее немного крови (естественно, с тканевой жидкостью - не помешает), и, безо всяких консервантов, разбавляйте ее в различных соотношениях. Положительную пробу (если сама жизнь "не позаботилась" о таком остром эксперименте) обычно готовят, насыщая раствор крови (реже - неразбавленную кровь) СО, получаемым из муравьиной и концентрированной серной кислот (можно просто подержать небольшое количество крови тонким слоем в одной склянке с такой реакционной смесью, без прямого контакта жидкостей, естественно). С вопросом о консерванте ничем помочь не могу, ибо с живой кровью не работаю. Попробуйте спросить об этом у любого лаборанта, когда в очередной раз придете сдавать кровь на общий клинический анализ. Успехов!

Изменено 1 Марта, 2011 в 01:10 пользователем chemist-sib

[Stalker209]

Благодарю Вас, chemist-sib

 

Естественно, реакция будет проводиться ради интереса, если бы была необходимость делать определение для более серьёзных целей - сделал бы хроматографию.

 

Теперь буду с нетерпением ждать анализа крови в поликлинике (фраза звучит, наверное, несколько ненормально )

[chemist-sib]

...Теперь буду с нетерпением ждать анализа крови в поликлинике (фраза звучит, наверное, несколько ненормально )

На здоровье! А насчет смысла фразы - так в любой ситуации надо стараться получать удовольствие... ну, или пополнять багаж знаний. Удачи по жизни!

[EGOR-KA]

Stalker209 - это не пиетка, а капилляр Панченкова, Деления нанесены в миллиметровой шкале и редназначен он в большей стеени для оределения СОэ - скорости оседания эритроцитов (за час). А объём кровы вы ею точно не измеряете, так как просвет капилляра может незначительно отличаться, следовательно будет отличаться и объём.

[Stalker209]

EGOR-KA.

 

Мы, скорее всего, немного не поняли друг друга. На общем клиническом используются 2 стержня. Сначала лаборант набирает в один стержень, пока не наберёт определённый объём, а потом его сдувает оттуда(не знаю, как правильно сие действо назвать) на стекло, по которому кровь размазывают тонким слоем. А ВОТ ПОТОМ УЖЕ она набирает второй стержень (капилляр Панченкова) и ОСТАВЛЯЕТ кровь в нём. Но мне более интересен тот, в который она набирает и ВЫДУВАЕТ из него кровь. В принципе, они похожи.

 

Могу в чём-то ошибаться по незнанию ,но процедуру я помню достаточно хорошо и не думаю, что у нас в районной п-ке она сильно отличается от Вашей.

 

С уважением. B)

[EGOR-KA]

EGOR-KA.

 

Мы, скорее всего, немного не поняли друг друга. На общем клиническом используются 2 стержня. Сначала лаборант набирает в один стержень, пока не наберёт определённый объём, а потом его сдувает оттуда(не знаю, как правильно сие действо назвать) на стекло, по которому кровь размазывают тонким слоем. А ВОТ ПОТОМ УЖЕ она набирает второй стержень (капилляр Панченкова) и ОСТАВЛЯЕТ кровь в нём. Но мне более интересен тот, в который она набирает и ВЫДУВАЕТ из него кровь. В принципе, они похожи.

 

Могу в чём-то ошибаться по незнанию ,но процедуру я помню достаточно хорошо и не думаю, что у нас в районной п-ке она сильно отличается от Вашей.

 

С уважением. B)

В стандартный набор для забора общего анализа крови входит два капилляра Панченкова, скариикатор и педметное стекло. В один капилляр берётся кровь для оперделения соэ, а вторым она просто набирает кровь (его не испльзут повторно т.к. перед забором крови для определения соэ капилляр промывают 5% цитрата натрия, а кровь которую выдувают на стекло - использут для подсчёта лейкоцитарной формулы, ненужно что бы на него поал цитрат) Потому кровь берут с помощь капииляра Панченкова, который в принцепи в данном случае используется не по назначению. Кстати, если вы заметили, когда лабарант бнрёт кровь в капилляр в него попадает воздух (т.е. в капилляре чередутся участки заполненные кровь и воздухом) потому лабарант определяет количество крови на глаз, и у него нет необходимости знать точный объём крови, т.к. кровь "размазывается по стеклу" для подсчёта соотношения лейкочитов (лейкоцитарная формула), а для подсчёта количества форменных элементов используется камера Горяева, которая имеет определённый объём, кровь в неё наливается с излишком, а лишняя кровь вытекает за её приделы. Потому при общем аналезе крови лабаранту нет необходимости в точных объёмах крови.

[Stalker209]

Благодарю за ответ.

 

EGOR-KA. Да-да. Я это и имел в виду. Мне, в принципе, знать точный объём и не надо. Надо приблизительный. Судя по всему, Вы достаточно хорошо знаете методику работы с кровью. Не могли бы Вы подробнее рассказать о консервировании крови цитратом натрия? Как, что, где, в каких соотношениях... Потому что если для чистоты пробы брать 2 образца и для эталона насыщать один из них CO по-максимуму, то необходимо консервировать кровь, иначе она 100 раз свернётся за это время...

 

Заранее благодарен за ответ.

[EGOR-KA]

Благодарю за ответ.

 

EGOR-KA. Да-да. Я это и имел в виду. Мне, в принципе, знать точный объём и не надо. Надо приблизительный. Судя по всему, Вы достаточно хорошо знаете методику работы с кровью. Не могли бы Вы подробнее рассказать о консервировании крови цитратом натрия? Как, что, где, в каких соотношениях... Потому что если для чистоты пробы брать 2 образца и для эталона насыщать один из них CO по-максимуму, то необходимо консервировать кровь, иначе она 100 раз свернётся за это время...

 

Заранее благодарен за ответ.

Я провоидил эту пробу дома в "кустарных условиях", гидрооксид натрия был непонятно какой концентрации но точно не 30%, а где-то около 10% поба быля ясное дело отрецательной (она стала бурой) т.к. кровь была моя. Насколько я знаю, пробы такого рода не нуждатся в точности, результат всегда есть. Соотношения кровь:реактив 1:1 или 1:2 без разницы. По поводу консервирования смогу сказать вам через пару деньков. Кстати на капелляре Панеченкова, как раз таки и нанесеены отметки для соотношения взятого цитрата и крови.