Проблемы с колонкой ВЭЖХ

[Timboss]

Здравствуйте. При работе с вэжх возникла проблема с превышения давления системы/колонки. Занимаюсь очисткой олигонуклеотидов, работал при полном закрытии вентиля 4 кан.насоса, давление в норме было, но в какой-то момент давление стало превышать более 400 бар и отключается. Промывал чистым ацетонитрилом часов 5, не помогло. Базовая линия сама ровная. Пока работаю при небольшом открытом вентиле насоса, чтоб давление держать в норме. Прибор Agilent 1100, колонка clarity phenomenex, размеры и сорбент не помню.  Что можно сделать в данном случае, колонку испортил?

[chemister2010]

Либо в системе пузырек на входе (можно открутить колонку на входе, промыть элюентом и прикрутить залив вход элюентом, чтоб вытеснить пузырек), либо загрязнение. 

Во втором случае поведение зависит от того с чем работали и какая колонка. Некоторые рекомендуют обратную промывку - это простой метод, но нарушающий набивку колонки; чаще всего он помогает, но можно и угробить колонку. Более классический способ - отмывка набором растворителей; для обратнофазовых колонок - от 5% ацетонитрила до дихлорметана и обратно. 

[cty]

Если вместо колонки переходник поставить, давление большое? Если да, то забит какой-то капилляр или кран-дозатор. Если нет, то проблема с колонкой. В первом случае отключайте последовательно по одному соединению, начиная с конца, пока давление не упадет при прокачивании элюента. После отключения какого соединения давление снижается - после того соединения и забит жидкостный тракт. Если работаете водными буферными растворами, то мыть систему чистым ацетонитрилом, не промыв водой от солей, - плохая идея, т.к. соли выпадают в осадок и дают засор.

[Timboss]

В 22.11.2022 в 20:15, cty сказал:

Если вместо колонки переходник поставить, давление большое? Если да, то забит какой-то капилляр или кран-дозатор. Если нет, то проблема с колонкой. В первом случае отключайте последовательно по одному соединению, начиная с конца, пока давление не упадет при прокачивании элюента. После отключения какого соединения давление снижается - после того соединения и забит жидкостный тракт. Если работаете водными буферными растворами, то мыть систему чистым ацетонитрилом, не промыв водой от солей, - плохая идея, т.к. соли выпадают в осадок и дают засор.

Систему проверил, давление в норме, не растет. Как регенерировать колонку?

Долгая промывка ацетонитрилом не помогает

[cty]

Читайте, что написано в описании вашей колонки. Обычно там есть процедуры регенерации. Возможно, колонка сдохла окончательно.

Пользуйтесь защитной предколонкой и фильтруйте пробы через 0.45 или 0.2 мкм.

Изменено 22 Ноября, 2022 в 17:30 пользователем cty