Реакция EDC и NHS друг с другом в воде без присутствия карбоновой кислоты

[ash111]

В 22.06.2025 в 12:55, Miriada сказал:

ри снижении загрузки EDC и NHS в 2 раза концентрация чистого инсулина увеличивается на 50%, концентрация первого побочного продукта снижается на 50%, а второго — на 38%.

аааа стоп. примесь же образуется вообще безо всяких наночастиц, верно?

В 22.06.2025 в 12:55, Miriada сказал:

Да, я как раз хотела провести два контрольных эксперимента - один только с NHS, а другой только с EDC, чтобы понять, кто виноват  

Да, полезно. NHS окислитель, а EDC каплинг агент, оба могут чтото нехорошее сделать. Только по идее если процесс обратимый (после диализа) то видимо NHS менее причастен к результату, там же на диализе не может восстановление произойти, верно?

[Miriada]

В 22.06.2025 в 20:00, ash111 сказал:

аааа стоп. примесь же образуется вообще безо всяких наночастиц, верно?

Да, верно. Контрольный эксперимент, когда у нас все то же самое, но наночастицы, покрытые 3-меркаптопропионовой кислотой, не добавляются - дает абсолютно тот же результат, что и с ними - то же самое количество инсулина и и то же самое количество этих двух загадочных примесей. 

[ash111]

В 22.06.2025 в 13:05, Miriada сказал:

Да, верно. Контрольный эксперимент, когда у нас все то же самое, но наночастицы, покрытые 3-меркаптопропионовой кислотой, не добавляются - дает абсолютно тот же результат, что и с ними - то же самое количество инсулина и и то же самое количество этих двух загадочных примесей. 

То есть саммари)

1) Инсулин дает с EDC/NHS два изомерных вещества с массой инсулин +56-57

2) Эти вещества тем не менее относительно неустойчивы и в неких условиях дают обратно инсулин.

 

Все верно?

[Miriada]

В 22.06.2025 в 20:00, ash111 сказал:

аааа стоп. примесь же образуется вообще безо всяких наночастиц, верно?

Да, полезно. NHS окислитель, а EDC каплинг агент, оба могут чтото нехорошее сделать. Только по идее если процесс обратимый (после диализа) то видимо NHS менее причастен к результату, там же на диализе не может восстановление произойти, верно?

Я думаю, гидролиз приводит к повышению концентрации чистого инсулина и уменьшению этих побочных продуктов 

[ash111]

В 22.06.2025 в 13:12, Miriada сказал:

Я думаю, гидролиз приводит к повышению концентрации чистого инсулина и уменьшению этих побочных продуктов 

да, но не любая модификация легко разрушается гидролизом. Допустим получился там пропиоамид, фиг с два он так просто разрушится потом.

[Miriada]

В 22.06.2025 в 20:11, ash111 сказал:

То есть саммари)

1) Инсулин дает с EDC/NHS два изомерных вещества с массой инсулин +56-57

2) Эти вещества тем не менее относительно неустойчивы и в неких условиях дают обратно инсулин.

 

Все верно?

1) - скорее да, дело в том, что выделенные фракции перед MS анализом были обработаны трипсином и разрушены на более мелкие пептиды

2) - я бы сказала, что они устойчивы. Да, тут есть какой-то обратимый процесс, после диализа соотношение трех фракций меняется, но затем оно остается прмерно одним и тем же - изучение стабильности такого продукта (в форме порошка) в течение 3 месяцев с помощью HPLC, показывает, что содержание этих примесей то повышается немного, то понижается, а инсулина соответсвенно - то понижается, то повышается - немного странные наблюдения 

В 22.06.2025 в 20:15, ash111 сказал:

да, но не любая модификация легко разрушается гидролизом. Допустим получился там пропиоамид, фиг с два он так просто разрушится потом.

Тоже верно. Буду перепроверять данные масс-спектрометрии - уж очень невероятные модификации 

Проведу дополнительные контрольные эксперименты и отчитаюсь - в конце концов, я думаю, эти побочные продукты будут идентифицированы - и эта информация может быть полезна.

[ash111]

В 22.06.2025 в 13:20, Miriada сказал:

1) - скорее да, дело в том, что выделенные фракции перед MS анализом были обработаны трипсином и разрушены на более мелкие пептиды

2) - я бы сказала, что они устойчивы. Да, тут есть какой-то обратимый процесс, после диализа соотношение трех фракций меняется, но затем оно остается прмерно одним и тем же - изучение стабильности такого продукта (в форме порошка) в течение 3 месяцев с помощью HPLC, показывает, что содержание этих примесей то повышается немного, то понижается, а инсулина соответсвенно - то понижается, то повышается - немного странные наблюдения 

Тоже верно. Буду перепроверять данные масс-спектрометрии - уж очень невероятные модификации 

То есть условно говоря мы трипсином развалили, и потом увидели что кусок, который при разваливании просто инсулина должен быть с молекулярным весом М, теперь стал с весом M+56, верно?

[Miriada]

Новые данные по сравнению продукта до и после диализа тоже получу уже в начале этой недели, и смогу подтвердить обратимость реакций 

[ash111]

И этот кусок это вот тот самый, где концевой глицин, поэтому мы считаем что именно с глицином там чтото связалось?

при этом трипсин мог порвать и саму новую присобаченную штуку наверно то есть 56 это то что осталось после того как трипсин там похозяйничал)) вряд ли вы бы увидели там чтото очень низкомолекулярное, что отвалилось от присоединенной части..

В 22.06.2025 в 13:26, Miriada сказал:

Новые данные по сравнению продукта до и после диализа тоже получу уже в начале этой недели, и смогу подтвердить обратимость реакций 

Ну окей, посмотрим) интересно!)

[Miriada]

Я еще хочу все-таки проверить молекулярные массы фракций без обработки трипсином. 

Данные говорят, что модифицирован глицин в этом фрагменте GFFYTPK - он находится ближе к концу B-цепи (это глицин в положении B23)- странно, конечно, я бы ожидала модификации на концах обеих цепей 

Изменено 22 Июня, 2025 в 10:36 пользователем Miriada