Реакция EDC и NHS друг с другом в воде без присутствия карбоновой кислоты

[Miriada]

В 22.06.2025 в 20:27, ash111 сказал:

И этот кусок это вот тот самый, где концевой глицин, поэтому мы считаем что именно с глицином там чтото связалось?

при этом трипсин мог порвать и саму новую присобаченную штуку наверно то есть 56 это то что осталось после того как трипсин там похозяйничал)) вряд ли вы бы увидели там чтото очень низкомолекулярное, что отвалилось от присоединенной части..

Ну окей, посмотрим) интересно!)

Трипсин крайне селективен - Он преимущественно расщепляет пептидную цепь после остатков аргинина (Arg или R) и лизина (Lys или K), если за ними не следует пролин (Pro или P).

[ash111]

В 22.06.2025 в 13:41, Miriada сказал:

Трипсин крайне селективен - Он преимущественно расщепляет пептидную цепь после остатков аргинина (Arg или R) и лизина (Lys или K), если за ними не следует пролин (Pro или P).

Спасибо!) эти моменты я плохо знаю

[Miriada]

Да, контрольные эксперименты подтвердили, что обе инсулиновые примеси появляются именно из-за EDC·HCl. В присутствии только NHS на HPLC-хроматограмме наблюдается только пик инсулина.

 

Кстати, если из системы убрать Ag₂S-квантовые точки, покрытые 3-меркаптопропионовой кислотой, то HPLC-хроматограмма идентична той, что получается у продукта, полученного с наночастицами: концентрация инсулина с MPA-QD — 34,10 мкг/мл, а без них — 35,94 мкг/мл. Думаю, при такой процедуре конъюгация не работает, зато EDC селективно модифицирует инсулин! Я уменьшила количество EDC и NHS по отношению к инсулину, чтобы снизить количество этих двух побочных продуктов, и наночастицы начали агрегировать. Как будто инсулин не конъюгируется, но EDC и NHS всё равно влияют на поверхность и стабильность квантовых точек.

[ash111]

В 25.06.2025 в 14:57, Miriada сказал:

Да, контрольные эксперименты подтвердили, что обе инсулиновые примеси появляются именно из-за EDC·HCl. В присутствии только NHS на HPLC-хроматограмме наблюдается только пик инсулина.

 

Кстати, если из системы убрать Ag₂S-квантовые точки, покрытые 3-меркаптопропионовой кислотой, то HPLC-хроматограмма идентична той, что получается у продукта, полученного с наночастицами: концентрация инсулина с MPA-QD — 34,10 мкг/мл, а без них — 35,94 мкг/мл. Думаю, при такой процедуре конъюгация не работает, зато EDC селективно модифицирует инсулин! Я уменьшила количество EDC и NHS по отношению к инсулину, чтобы снизить количество этих двух побочных продуктов, и наночастицы начали агрегировать. Как будто инсулин не конъюгируется, но EDC и NHS всё равно влияют на поверхность и стабильность квантовых точек.

мне кажется таки надо менять метод, не?🤭

И спрашивать изобретателя, как он изобрел то что в реальности нифига не работает)

[Loiso Pondohva]

В 26.06.2025 в 20:53, ash111 сказал:

мне кажется таки надо менять метод, не?🤭

И спрашивать изобретателя, как он изобрел то что в реальности нифига не работает)

Вот я думал тоже самое написать, но подумал будет слегка некоректно)

[ash111]

В 26.06.2025 в 21:56, Loiso Pondohva сказал:

Вот я думал тоже самое написать, но подумал будет слегка некоректно)

Я просто это уже писал странице на второй)

Автор вполне грамотна и активна в своем деле, так что там все будет хорошо😊

[Loiso Pondohva]

В 26.06.2025 в 20:53, ash111 сказал:

мне кажется таки надо менять метод, не?🤭

И спрашивать изобретателя, как он изобрел то что в реальности нифига не работает)

Моя биолотехнологическая интуиция подсказывает что этот метод можно шлифануть при большом желании, подобрав адекватный буфер и pH
Потому что метод - гуано редкостное по многим причинам 

Но голова как-то не соображает что именно можно сделать, т.к я давно к наночастицам не прикасался и ленивый)

В 26.06.2025 в 20:59, ash111 сказал:

Я просто это уже писал странице на второй)

Автор вполне грамотна и активна в своем деле, так что там все будет хорошо😊

Более чем! Я хотел присоединиться к вашей дискуссии, но понял что не могу ничего добавить сверх того что уже было написано вами двумя
В полном восторге
Именно так и должно бы выглядеть большинство тем на форуме

Пока гляжу на вопрос другой авторши с её ИК спектрами и тоже пытаюсь разобраться. Эх, старею. Раньше такие вещи на раз два щёлкались. Ещё пару лет и в гроб пора)

Изменено 26 Июня, 2025 в 19:02 пользователем Loiso Pondohva

[ash111]

В 26.06.2025 в 22:00, Loiso Pondohva сказал:

я давно к наночастицам не прикасался и ленивый)

меня смущает меркаптопропионовая кислота и NHS, оно окислять может ту серу.

В 26.06.2025 в 22:00, Loiso Pondohva сказал:

Ещё пару лет и в гроб пора)

дорого все нынче, давай вскладчину место на кладбище брать. В ипотеку, понятно😂

[Loiso Pondohva]

В 26.06.2025 в 21:04, ash111 сказал:

дорого все нынче, давай вскладчину место на кладбище брать. В ипотеку, понятно😂

Хаха, лучше-раньше, пока инфляция бессердечная и перенаселение не добило ситуацию до абсурда)
Но учитывая что я вас раза в 2 младше почти, боюсь родные не поймут такой "инвестиции"

По методу я так подумал. 
А что если в порядке бреда использовать не воду, а какой-нибудь стабильный не такой полярный орг растворитель? Ситуация лучше не станет?
И не щелочить до 10, а аккуратно до 8.5 попробовать...(а инсулин добавлять ещё до подщелачивания)

 

[ash111]

В 26.06.2025 в 22:19, Loiso Pondohva сказал:

не поймут такой "инвестиции"

когда поймут, ипотека будет уже дороже🤭

 

В 26.06.2025 в 22:19, Loiso Pondohva сказал:

Ситуация лучше не станет?

я предлагал только я знаю что там в белках же конформация важна а другая полярная штука может белок просто переподзавывернуть. отмывать потом от полярной фазы тоже наверно не айс. ДМСО по идее годится если оно не переподзавывертывает

В 26.06.2025 в 22:19, Loiso Pondohva сказал:

аккуратно до 8.5 попробовать.

да, норм, это ж буфер. там нет задачи протоны срывать - только кислоту нейтрализовывать.