Электрофорез гликозаминогликанов

[Vrednucha]

Здравствуйте,  я врач лабораторной генетики, недавно сменила профиль лаборатории и столкнулась в новом учреждении с горизонтальным электрофорезом. По условиям: провожу электрофорез на ацетатцеллюлозных пленках,  буфер - ацетат бария Рн 4,8, пленку соединяю с буфером мостиками из фильтровальной бумаги, направление от катода к аноду. Вроде идет, результаты получаю. Но есть сложности: 1. Электрофорез не идет если плёнка лежит на самой камере, идет только если под ней рамочка и она не касается камеры всей поверхностью - почему?  2. По методике в результате первым к линии старта должен быть гепарин сульфат, после - хондроэтин сульфат (я так понимаю первый имеет большую молекулярная массу), у меня выходит наоборот - тот же вопрос, почему.

3. Самое странное: поставила пробы в 2 ряда (на одной плёнке 2 линии старта одна скраю, вторая ниже на 5 см) и первый ряд пошел как обычно, а второй в противоположном направлении, не пойму, что не так. Есть подозрение,  что перепутала полярность (ставлю от плюса к минусу) но почему тогда пробы не убегают, а идут в нужном направлении и как может электрофорез идти одновременно в двух направлениях? 

[chemister2010]

Не сталкивался на практике с электрофорезом, но могу выдвинуть предположения.

1. Видимо когда пленка лежит на камере, возникает слой буфера с меньшим сопротивлением и ионный ток идет там, а не через пленку.

2. Проверьте что вы используете в качестве буфера - ацетат бария или ацетат натрия? Скорость движения может еще зависеть от степени сульфатации - чем больше заряд, тем больше подвижность.

3. Проверьте насколько хорошо смочилась буфером поверхность пленки, возможно не произошла замена ионов.

[Vrednucha]

Спасибо, как раз на счет плёнки никак  не могла ничего придумать)

Буфер точно ацетат бария, а плёнка замачивается перед проведением с полчаса, поверхность должна быть подходящая.

За выходные выстроила пару теорий, от чего так может происходить, сегодня буду проверять)

Изменено 28 Июня, 2021 в 02:09 пользователем Vrednucha

[МВВ]

28.06.2021 в 05:08, Vrednucha сказал:

Спасибо, как раз на счет плёнки никак  не могла ничего придумать)

Буфер точно ацетат бария, а плёнка замачивается перед проведением с полчаса, поверхность должна быть подходящая.

За выходные выстроила пару теорий, от чего так может происходить, сегодня буду проверять)

А с другими препаратами электрофорез пробовали? Мне интересны противогрибковые - можно ли их загнать поглубже под ногтевую пластинку электрофорезом? не хочется (да и врачи не рекомендую людям в возрасте) глотать системные препараты.

[St2Ra3nn8ik]

7 часов назад, МВВ сказал:

Мне интересны противогрибковые - можно ли их загнать поглубже под ногтевую пластинку электрофорезом?

Может, проще их с ДМСО аптечным смешать и нанести? Должен протащить.

[dmr]

1 час назад, St2Ra3nn8ik сказал:

Может, проще их с ДМСО аптечным смешать и нанести? Должен протащить.

Конечно протащит

[St2Ra3nn8ik]

28 минут назад, dmr сказал:

Конечно протащит

О чём и речь. Вопрос риторический был.