Реакция Троммера для определения активности амилазы слюны

[kpokodil4]

Проводили стандартный опыт для определения активности амилазы и ее термолабильности. Ход опыта был такой:

1) В одну пробирку добавляют 2-3 мл слюны, доводят ее до кипения и кипятят 5-8 минут

2)В три пробирки добавляем 10 капель р-ра крахмала 1%, в первую дополнительно добавляем 10 капель слюны, разведенной в 10 раз, во вторую 10 капель прокипяченной слюны из п.1, в третью просто дистиллированной воды в качестве контрольной пробы.

В итоге имеем три пробирки

 I - с разведенной слюной

 II - с прокипяченной слюной 

 III - без слюны

3) Далее к каждой пробирке добавили 5 капель NaOH и 3 капли CuSO4, осторожно нагрели верхнюю часть пробирки до закипания раствора и кипятили 1 минуту. 

В итоге получили такую картину:

• В пробирке с разбавленной слюной наблюдается положительная реакция Троммера, чего и стоило ожидать ввиду полного разложения крахмала амилазой слюны до мальтозы и глюкозы ( пробирка по середине)
• В пробирке без слюны вообще (крайняя справа) видно что реакция Троммера не протекает, есть лишь осадок Cu(OH)₂ почерневший от нагревания 
• А вот собственно и главный вопрос: В пробирке с прокипячённой слюной, как я думал, должна быть такая же ситуация как в пробирке без слюны вообще, т.е. амилазы разрушена кипячением, следовательно крахмал не расщепляется и реакции Троммера на альдегидную группу не будет, собственно ее и нет, НО!!! Мы видим что раствор над осадком Cu(OH)₂  имеет немного фиолетовый цвет и вот откуда он берется мне вообще не понятно.

Такой результат получили и при повторном эксперименте, т.е. это вряд ли случайность, связанная с неаккуратным выполнением эксперимента. Йод тоже никто никуда не добавлял, т.е. этот вариант тоже отметается, да и тем более йод окрасил бы раствор в синий цвет. Амилазы в прокипяченной слюне точно нет, т.к. проводили так же опыт на йодную пробу и результаты в пробирке с прокипяченной слюной и вообще без слюны были одинаковы - интенсивное синее окрашивание. 

Так что вопрос: Откуда фиолетовая окраска раствора в пробирке с прокипячённой слюной?

 

Изменено 19 Октября, 2023 в 12:35 пользователем kpokodil4

[St2Ra3nn8ik]

19.10.2023 в 12:34, kpokodil4 сказал:

Откуда фиолетовая окраска раствора в пробирке с прокипячённой слюной?

Могу ошибаться, но вероятно амилазы не полностью денатурировались при "варке" и сохранили небольшую активность, достаточную для образования небольшого количества мальтозы из крахмала, давшей немного мальтозата меди (аналогичного известному сахарату меди).

Изменено 19 Октября, 2023 в 19:31 пользователем St2Ra3nn8ik

[ash111]

В 19.10.2023 в 15:34, kpokodil4 сказал:

Откуда фиолетовая окраска раствора в пробирке с прокипячённой слюной?

вероятно потому что денатурированная амилаза дает комплекс с двухвалентной медью. Запросто такое может происходить, там есть чему и как комплексовать.

Возможно что и в первой пробирке некий комплекс образуется, просто его не видно изза интенсивной окраски раствора

[St2Ra3nn8ik]

21.10.2023 в 15:08, ash111 сказал:

вероятно потому что денатурированная амилаза дает комплекс с двухвалентной медью. Запросто такое может происходить, там есть чему и как комплексовать.

Кстати, да. Биуретовая реакция.

[Химикур]

Наличествует любопытный химический факт: Ph слюны становится отчётливо щелочным (10) после употребления любой пищи(еды). Хлеб. Сахар . Кислое варенье. ___ Достаточно одной "таблэтки"/чайной ложки . Чтобы просто  попало на язык.______ Индикаторные бумажки осиневают  буквально через 15 секунд и продолжаю упрямо осиневать в течение часа. (плеваться бесполезно)._______ То есть, можно предположить, что гипоталамус даёт команду и  организм направляет все щелочные резервы из крови в слюнные железы. 

[ash111]

В 22.10.2023 в 05:55, Химикур сказал:

Наличествует любопытный химический факт: Ph слюны становится отчётливо щелочным (10) после употребления любой пищи(еды). Хлеб. Сахар . Кислое варенье. ___ Достаточно одной "таблэтки"/чайной ложки . Чтобы просто  попало на язык.______ Индикаторные бумажки осиневают  буквально через 15 секунд и продолжаю упрямо осиневать в течение часа. (плеваться бесполезно)._______ То есть, можно предположить, что гипоталамус даёт команду и  организм направляет все щелочные резервы из крови в слюнные железы. 

Я конечно могу ошибаться, но слюнные железы - это не почки чтобы фильтровать кровь и полученное куда-то выводить)))

[Химикур]

22.10.2023 в 18:40, ash111 сказал:

Я конечно могу ошибаться, но слюнные железы - это не почки чтобы фильтровать кровь и полученное куда-то выводить)))

А откуда они берут воду? ( в слюне 98% воды).____ Получается, только из крови. Больше неоткуда.  ______________ О! Оказывается наши  слюнные железы вырабатывают за сутки  2 литра  "воды" . 

Изменено 23 Октября, 2023 в 06:57 пользователем Химикур

[Химикур]

?..... и,  как по команде, в течении нескольких секунд, Ph слюны резко меняется. Ощелачивается. То ли добавляются щелочные микроэлементы ( из крови) , то ли каким-то образом  уничтожаются ионы водорода....______ В интернете я про это ничего не нашёл. 

.... это если на язык попадает что-нибудь съедобное.

[носки шалфея]

В 22.10.2023 в 05:55, Химикур сказал:

Индикаторные бумажки осиневают  буквально через 15 секунд и продолжаю упрямо осиневать в те

У меня тесты синеют, это 7-ph.

Если меньше, то розовые.

[Химикур]

23.10.2023 в 10:50, носки шалфея сказал:

У меня тесты синеют, это 7-ph.

Если меньше, то розовые.

 Натощак синеют?.......  а после еды? ________ Насколько я понимаю, цветовая гамма зависит от производителя.  У меня   уровню Ph 7 соответствует цвет хаки. Жёлто-зелёный.